质粒（plasmid）是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，现习惯用来指细菌、真菌、酵母菌以及放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。已知的大多数的细菌质粒都是共价、闭合、环状DNA分子(简称cccDNA)。质粒在基因工程和分子生物学的发展过程中起到了至关重要的作用。同时作为载体在基因克隆技术等方面也已经得到广泛应用。
别小看这个基础实验，很多小伙伴在做这类实验的过程中同样会遇到各种问题。例如：质粒DNA提取产量低？内毒素清除离心后分层不彻底？下游结果不理想？等等。想知道这类问题如何解决吗，一起来看看小V为你总结的“精华”吧！
▶ 中低拷贝质粒：长片段质粒和表达型载体常以中低拷贝数为主，加大菌体使用量，菌液过夜培养
▶ 菌种问题：菌种保存过程中存在质粒丢失现象，培养细菌前最好先划线活化，以稳定产量
▶ 细菌未充分裂解：细菌须在Buffer P1/RNase A 中充分重悬，成团的细菌因无法裂解会降低产量
▶ 试剂准备有误：Buffer PW2 若有沉淀析出需加热溶解；漂洗液加入乙醇体积不准确
▶ 洗脱不充分：将Elution Buffer 预热至55℃，并重复二次洗脱
▶ 提升离心温度：当室温环境较低时，设置离心机的温度至30℃
▶ 加大离心机转速：由说明书中的12,000×g 提升至14,000×g
▶ 降低离心机降速：修改离心机降速参数至3左右
▶ 增加离心时间：由说明书中的10 min增加至15 min
▶ 培养时间太长：菌液培养时间需控制在12-16 h
▶ 裂解问题：加入Buffer P2 时，必须轻柔颠倒混匀；处理多样品时，时间从加入Buffer P2 时算起，总时间不要超过5 min
▶ 盐污染：确保用Buffer PW2 洗涤两次
▶ 乙醇污染：在最后一次Buffer PW2 洗涤后可将吸附柱离心时间由原来1 min 增加至2 min
▶ 质粒降解：用endA+的菌株如HB101 或其它野生型菌株，含有高丰度的核酸酶，必须加入Buffer PW1
▶ 膜脱落：在洗脱质粒时硅胶膜在离心过程中可能会发生脱落，应10,000×g 离心2 min 后再把质粒转移至新的离心管中
简便快速类产品
针对不同质粒类型，诺唯赞提供如下解决方案：
Vazyme #DC201（质粒小提试剂盒）特点：
▶ 提取得率高：可以在1-5 ml过夜培养菌液中提取出的质粒DNA高达35 μg
▶ 兼容性广：可以提取高、低拷贝质粒
Vazyme #DC211（快速质粒小提试剂盒）特点：
▶ 技术革新、一步上柱：新型独特裂解技术，将菌液裂解、中和、重悬三步合为一步
▶ 极速：适用于高拷贝质粒、仅需6 min即可完成质粒提取
高产无内毒类产品
针对质粒中内毒素难去除的现象，诺唯赞提供如下解决方案：
Vazyme #DC202（无内毒素质粒大提试剂盒）特点：
▶ 适用于150-300 ml过夜培养菌液
▶ 高产、无内毒素
Vazyme #DC203（无内毒素质粒小提试剂盒）特点：
▶ 适用于1-5 ml过夜培养菌液
▶ 高产、无内毒素
▶ 无需冷热交替、操作简便
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8月新品活动火热进行中 活动时间：8月1-31日
