质粒最早是20世纪50年代初期在大肠杆菌中发现的，是细菌、酵母菌和放线菌等生物中独立于染色体（或拟核）以外的闭合环状双链DNA分子。质粒提取纯化是分子生物学实验中最基础的技术，也是疫苗、基因治疗上游研发过程中的重要环节。然而质粒提取过程中常会伴有内毒素的出现，内毒素水平可直接影响后续的细胞转染、显微注射、稳定细胞株的筛选等。

那么内毒素是什么，怎么会和质粒一同出现？它又是如何影响细胞转染等下游实验的？让我们和小V来一探究竟吧~

内毒素是革兰氏阴性菌（如伤寒杆菌，痢疾杆菌，大肠杆菌，沙门氏菌等）的菌体中存在的毒性物质的总称。它位于细胞壁的最外层，覆盖在坚韧细胞壁的粘肽上，是多种革兰氏阴性菌的细胞壁成分。细菌存活时不释放，只有当菌体自溶或用人工方法使细菌裂解后才释放，又叫脂多糖，可称为“热原”。

在质粒DNA制备的菌体裂解过程中，内毒素分子被释放到溶菌液中。由于内毒素两亲性和负电荷性，性质类似于DNA，因此在质粒提取中会伴随质粒一同被提取出来，影响后续实验。在进行细胞转染实验时，内毒素可与质粒DNA竞争转染试剂，阻碍质粒DNA进入细胞膜和核孔复合物；同时转染过程中细胞通透性增加，内毒素进入细胞，导致细胞活性降低，影响转染效率，甚至造成细胞死亡。对于体外转染免疫细胞试验，内毒素可激活非特异性免疫，造成假阳性。另外，一般常用的转染技术都是基于电荷吸引的原理，如果质粒DNA中存在其他杂质，如盐离子，蛋白，代谢污染物等会影响转染复合物的形成，从而影响转染效率。

看到这相信大家已经明白当我们进行细胞转染、显微注射、基因治疗等这些要求极为严格的实验时，就需要用到高质量、无内毒素的质粒。今天小V就给大家介绍一款无内毒素质粒小提试剂盒FastPure^® EndoFree Plasmid Mini Kit（Vazyme #DC203），提取高纯质粒，消除实验后顾之忧，快来看看吧~

产量高：提取的质粒DNA产量高达50 µg

内毒素残留量：内毒素残留量≤0.1 EU/µg，下游可做转染级别实验

1.产量高

分别使用Vazyme #DC203(简称V)与其他产品 (A、B、C、D、E、F、G、H、I)，按照各自流程提取pUC57(高拷贝)和M3K(低拷贝)的质粒，对提取产物进行浓度测定(图1A、B)及跑胶检测(图1C、D)。结果表明，Vazyme #DC203 提取的质粒产量高、完整性好。

图1 . 质粒的检测结果

2.内毒素含量低

分别使用Vazyme #DC203(简称V)与其他产品 (A、B、C、D、E、F、G、H、I)，按照各自流程提取pUC57(高拷贝)和M3K(低拷贝)的质粒，对提取的产物进行内毒素残留量的测定(图2A、B)。结果表明，Vazyme #DC203 提取的质粒内毒素残留量低，且优于其他同类产品。

图2. 质粒内毒素残留量的检测结果

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等等，先别走，我们无内毒素质粒小提试剂盒DC203的体验官们想给大家分享一下自己的亲身体验~

提取时长相比其他产品缩短数倍，操作便捷，提取效果好，浓度高。

操作简便易行，提取效果和预期一致。

产量高/纯度好/内毒素残留量低，体验很好，质量很靠谱。

提取总时长约25分钟，提取的浓度和纯度很好。

方便；浓度较高。

操作快，产量高，纯度好。