病原检测一直是现代医学的热议话题,随着基因测序技术的迅猛发展,基于二代测序的宏基因组测序技术(mNGS)因其无需培养、检测全面且快速等优势,已成为了病原诊断的一大热点。然而,当面对临床样本珍贵、疑似混合感染、检测时间紧迫等等情境,则亟需一套简单快捷的解决方案。
好在,千呼万唤始出来,DNA&RNA共建库试剂盒强势来袭,无需抉择,一网打尽,为您带来mNGS新体验。
Vazyme #NC601和Vazyme #NCM601是分别针对Illumina和MGI高通量测序平台定向开发的DNA&RNA文库构建试剂盒。包括逆转录、双链cDNA合成、片段化、接头连接和文库扩增试剂。
本试剂盒采用优化升级的片段化酶,将DNA片段化、末端修复以及末端加A尾合并为一步,产物无需纯化,直接进行接头连接、文库富集,缩短了建库时间,同时兼容DNA、RNA和混合样本建库,极大降低了建库成本。优化的反应体系,提高了文库转化效率,能兼容更低投入量,可应用于病原微生物检测领域等。
图1. NC601共建库流程图
▶ 快速
操作简便,全流程只需3.5h。
▶ 兼容
可兼容10 - 100 ng的RNA、1 - 100 ng的DNA以及更低起始量的混合样本建库。
▶ 灵敏
建库性能优良,低丰度物种实现更好检出。
▶ 背景菌控制
严格质控,保证实验数据真实可靠。
1. 灵敏的病原检出
使用DNA&RNA混合模板投入建库,按Vazyme #NC601进行共建库及RNA建库,同时使用RNA建库产品Vazyme #NR605进行RNA建库,经质控合格后的文库使用Illumina HiSeq X10平台进行PE150测序 ,截取相同RNA数据量进行分析,比较Vazyme #NC601与Vazyme #NR605的物种检出。
图2. DNA/RNA共建库与分开建库RNA检出率
使用DNA&RNA共建库最常被关注的一个问题便是RNA的检出,使用Vazyme#NC601进行共建库及RNA建库,RNA检出情况一致。
2. 严格的背景菌质控
针对病原检测背景菌污染问题,诺唯赞对相关试剂建立了一系列评价标准和质控体系。在各个容易引入背景菌的环节实行严格防控措施,保证实验数据真实可靠。
3. NCM601适用于MGI平台测序
Vazyme#NCM601是针对华大平台定向开发的DNA&RNA共建库试剂盒。使用三个不同批次的Vazyme#NCM601,对不同投入量的DNA或RNA混合模板进行建库。经质控合格后的文库使用MGISEQ 2000平台进行PE150测序,各样本均截取相同数据量进行分析。
图3. NCM601物种检出
文库质控结果显示文库浓度及峰型产出正常,测序数据显示各物种均有检出。