书名：色谱技术丛书-高效液相色谱方法及应用（第三版）

书号：9787122321343

定价：98.00

作者：于世林

编辑推荐：

《高效液相色谱方法及应用》是《色谱技术丛书》中专门介绍液相色谱的分册，《高效液相色谱方法及应用》从仪器入手，先介绍各种分析方法，让读者对方法有了直观了解后，再介绍有关的色谱理论和操作技术，这样的内容安排便于读者学习和入门。

本次修订，根据液相色谱技术的发展，在内容上做了较大的扩充和调整，删去了体积排阻色谱及色谱分离条件优化两章，增补了亲水作用色谱法、疏水作用色谱法和高效液相色谱新技术进展三章。其余各种做了较大幅度的更新和调整。

《高效液相色谱方法及应用》（第三版）将成为您在液相色谱领域的入门书、工具书和工作指南。

内容简介：

本书是“色谱技术丛书”中专门介绍高效液相色谱的分册。书中从操作者的角度对高效液相色谱的分类发展与高效液相色谱仪器做了全面介绍，在此基础上对液固色谱法和液液色谱法、正相和反相键合相色谱法、亲水作用键合相色谱法、疏水作用键合相色谱法、微柱液相色谱法、二维高效液相色谱法等多种高效液相色谱方法的色谱分离条件、分析操作、实验技术和注意事项等进行了详细的阐述，并对梯度洗脱的原理和方法以及高效液相色谱法的基本理论做了系统介绍，总结了高效液相色谱新技术的进展。

本次修订根据高效液相色谱近年的发展对第二版内容做了大幅更新，新增了亲水作用键合相色谱法、疏水作用键合相色谱法以及高效液相色谱新技术的进展三章，删除了第二版中体积排阻色谱法和高效液相色谱分离条件的优化两章。对其他各章增补了仪器、填料、理论和应用方面的最新进展和技术资料。

本书适用于各领域中从事液相色谱分析工作的技术人员学习参考，也可作为高等院校分析化学及相关专业师生的教学参考书。

作者简介：

于世林，北京化工大学教授，毕业于北京大学化学系，曾任北京化工大学应用化学系系主任，现为分析化学教授，北京理化分析测试学会色谱分会理事。多年从事分析化学、色谱分析的教学和科研工作，承担多项有关高效液相亲和色谱固定相合成及应用的国家自然科学基金项目和北京市自然科学基金项目。主持编写《高效液相色谱方法及应用》《亲和色谱方法及应用》《波谱分析法》《分析化学》等著作和教材，参与《分析仪器手册》《化验员读本》等著作部分章节的编写工作。

读者对象：

生命科学、临床医学、药物研制、食品安全、环境监测、工业生产等领域从事色谱分析的技术人员，高等院校分析化学及相关专业师生

前言：

本书第2 版自2005 年出版至今经9 次重印，已销售12000 余册。在过去的十多年中，高效液相色谱技术已获重大的进展，为了充分反映高效液相色谱方法和技术的现状，特对本书进行修订。

高效液相色谱（HPLC）是有机定量分析的重要手段，当前在生命科学、临床医学、药物研制、食品安全、环境监测等多个领域已获广泛的应用。由于高效液相色谱方法总在科技发展的关键时刻，能够有效地解决所面临的复杂样品的分析任务，从而受到科学研究、工农业产品生产、环境保护和质量保证等诸多方面的青睐。

近十年来，高效液相色谱方法和技术在以下几个方面获得重要进展：

（1）在液相色谱固定相研制上，继全多孔硅胶微粒（TPP）固定相之后，迅速研制出表面多孔硅胶微粒（SPP）固定相。亚-2μm TPP（1.7μm）和亚-2μm SPP（1.3～1.7μm）的出现，使色谱柱的柱效由200000 塔板/m 提升到500000 塔板/m，为超高效液相色谱（UPLC）或超高压液相色谱（UHPLC）的快速发展奠定了坚实的基础，也为解决复杂样品的分析任务开辟了新思路。

（2）在固定相研制上的另一个重要进展是第二代整体柱的出现，第二代聚合物整体柱不仅可以分离大分子，也解决了对小分子的分析问题。第二代，特别是第三代硅胶整体柱的出现可用于多种样品的分析。今后，随无机-有机杂化材料整体柱的出现，它在提高柱效（现已超过100000塔板/m）和选择性方面，仍有潜在发展的能力。

（3）2009 年以后，在分离方法上，亲水作用色谱获得重要的发展，解决了对强极性、易电离化合物，特别是对极性小分子的分析问题，对制药工业的发展起到重要的推动作用。

（4）在检测器研制方面，迅速发展和推广了蒸发光散射检测器（ELSD）、带电荷气溶胶检测器（CAD）、多角度光散射检测器（MALSD）的使用，并且快速普及了液相色谱-质谱（LC-MS）和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）联用技术，为解决组成复杂样品的分析提供了强有力的检测手段。

（5）随着超高压液相色谱（UHPLC）技术的快速普及，高效液相色谱仪的压力上限逐步提高，已由6000psi(400bar)→9000psi(600bar)→15000psi(1050bar)→19000psi(1400bar)→22000psi(1500bar)；色谱仪体系的柱外效应提供的方差也大大减小，已由100μL2→50μL2→10μL2，高效液相色谱仪器的制作工艺已发生质的变化；分离性能优良、操作简便的超高压液相色谱仪已逐步取代经典的高效液相色谱仪器，由于流动相消耗的降低，节约了分析成本，分析工作的效率大大提高。

（6）由于高效液相色谱工作者智慧的充分发挥和勇于创新的精神，在色谱理论的应用中，发展了用动力学图示法来评价液相色谱柱的分离性能；创建了剪切驱动色谱分离方法；完善了微型芯片液相色谱实验技术，提出了与超临界流体色谱（SFC）相组合的超高效合相色谱（UPC2）方法。

高效液相色谱领域的上述重要进展，大大开拓了高效液相色谱方法和技术的应用，并解决了当代在有机分析实践中遇到的多种难题。

本书第三版增补了与上述重要进展相对应的内容，全书共分十二章，内容变动如下：

（1）重新撰写了第一章绪论、第二章高效液相色谱仪器简介、第三章液固色谱法和液液色谱法、第四章正相和反相键合相色谱法。

（2）增加了第五章亲水作用键合相色谱法、第六章疏水作用键合相色谱法和第十一章高效液相色谱新技术进展。

（3）部分修订了第七章梯度洗脱、第八章高效液相色谱法的基本理论、第九章微柱液相色谱法、第十章二维高效液相色谱法和第十二章建立高效液相色谱分析方法的一般步骤和实验技术。

（4）由于全书篇幅所限，删除了“体积排阻色谱法”和“高效液相色谱分离条件的优化”两章。

本次修订笔者参阅了相关文献资料，尤其是在“LC-GC North Am”或“LC-GC Europe”杂志上，由Ronald E Majors、John Dolan 和Michael W Dong 撰写的文献综述，对笔者有很大的启发和帮助。

笔者希望本书第三版能够帮助刚刚进入高效液相色谱领域的“新手”，使其在较短的时间了解高效液相色谱领域的现状，并能在掌握高效液相色谱分离原理的基础上，去解决科研和工业生产中的实际问题，在了解高效液相色谱新进展的过程中开阔思路，勇于创新，为高效液相色谱方法和技术的未来发展，贡献自己的智慧和力量。

本书承蒙丛书副主编刘虎威教授审阅，责任编辑也为本书顺利出版做了大量工作，特此致谢。

本次修订得到Agilent 公司的大力支持，应用支持部张之旭经理、李浪工程师提供了大量仪器说明书资料，Thermo Fisher Science 公司商务经理王国强提供了多种仪器说明书，Waters 公司提供了合相色谱技术资料，特此表示感谢，上述各种资料对本书的修订提供了有力的帮助。

鉴于笔者水平所限，本书不妥之处，欢迎读者指教。

北京化工大学 于世林

2018 年8 月于北京

目录：

第一章 绪论

第一节 高效液相色谱方法简介  2

一、液相色谱技术的初现—茨维特的经典实验  2

二、高效液相色谱方法的显现  3

三、高效液相色谱方法的发展现状  6

第二节 高效液相色谱方法的特点  13

一、与经典液相（柱）色谱法比较  13

二、与气相色谱法比较  14

三、高效液相色谱法的特点  15

第三节 高效液相色谱方法的分类  15

一、按溶质在两相分离过程的物理化学原理分类  15

二、按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类  17

第四节 高效液相色谱法的应用范围和局限性  19

一、应用范围  19

二、方法的局限性  19

参考文献  20

第二章 高效液相色谱仪简介

第一节 流动相及储液罐  23

一、储液罐  23

二、流动相脱气  24

第二节 高压输液泵及梯度洗脱装置  26

一、高压输液泵  26

二、输液系统的辅助设备  39

三、梯度洗脱装置  41

第三节 进样装置  44

一、停流进样装置  44

二、六通阀进样装置  45

三、自动进样器  47

第四节 色谱柱  48

一、柱材料及规格  48

二、柱填料和柱寿命  49

三、保护柱  50

四、柱连接方式  51

五、柱温控制  51

第五节 检测器  52

一、检测器的分类和响应特性  52

二、紫外吸收检测器  54

三、折光指数检测器  60

四、电导检测器  62

五、荧光检测器  63

六、蒸发光散射检测器  64

七、带电荷气溶胶检测器  68

八、多角度光散射检测器  70

九、质谱检测器  72

第六节 色谱数据处理装置  81

一、手持控制器  81

二、化学工作站  81

第七节 高效液相色谱仪器的发展趋势  82

一、从1969 年到1992 年  82

二、从1992 年到2002 年  83

三、从2002 年到2012 年  83

四、2012 年到现在  84

参考文献  88

第三章 液固色谱法和液液色谱法

第一节 分离原理  90

一、吸附系数  90

二、分配系数  91

第二节 固定相  92

一、液固色谱固定相  92

二、液液色谱固定相  106

第三节 流动相  107

一、表征溶剂特性的重要参数  109

二、液固和液液色谱的流动相  116

第四节 二元溶剂体系中液固和液液色谱的保留规律  117

一、溶质保留值的基本方程式  117

二、液固色谱的保留值方程式  118

三、液液色谱的保留值方程式  118

参考文献  119

第四章 正相和反相键合相色谱法

第一节 分离原理  120

一、正相键合相色谱法的分离原理  121

二、反相键合相色谱法的分离原理  121

第二节 固定相  123

一、键合固定相的制备及分类  123

二、键合固定相的性质  129

三、使用键合固定相应注意的问题  131

第三节 流动相  133

一、溶剂的选择性分组  133

二、在键合相色谱分析中选择流动相的一般原则  134

三、改善色谱分离选择性的方法  138

四、多元混合溶剂的多重选择性  140

五、由溶剂选择性三角形描述混合溶剂组成的特性  143

六、溶质保留值随溶剂极性变化的一般保留规律  143

七、用线性溶剂化自由能关系（LSER）来表征反相液相色谱中溶质的保留

值方程式  144

第四节 新型高效化学键合固定相  146

一、新型单齿键合固定相  146

二、新型双齿键合固定相  148

三、杂化有机/无机粒子材料  149

四、氟化烷基和苯基固定相  152

五、反相/离子交换混合模式固定相  154

第五节 化学键合固定相分类方法简介  157

一、Tanaka 分类方法  158

二、Tanaka 分类表征方法  160

三、扩展Tanaka 分类方法  161

第六节 离子对色谱法  166

一、分离原理  166

二、固定相、流动相和对（反）离子  167

三、影响离子对色谱分离选择性的因素  168

参考文献  171

第五章 亲水作用键合相色谱法

第一节 亲水作用液相色谱的分离机理  176

一、分子极性  176

二、分离机理  176

第二节 固定相  178

一、固定相的分类  178

二、固定相保留特性及选择性的评价标准  188

第三节 流动相  197

一、流动相的组成  197

二、流动相对保留值和选择性的影响  197

三、流动相各种影响因素的图示方法  205

第四节 静电排斥亲水作用液相色谱  207

参考文献  209

第六章 疏水作用键合相色谱法

第一节 疏水作用液相色谱的分离原理  211

一、蛋白质结构特点  212

二、疏水作用机理  212

三、两亲作用色谱  213

第二节 固定相  214

一、固定相载体  214

二、疏水配位体  215

第三节 流动相  215

一、流动相的组成  215

二、影响HIC 分离选择性的因素  216

第四节 疏水作用色谱的应用  217

一、疏水作用色谱的操作过程  217

二、蛋白质混合物的分离  218

参考文献  219

第七章 梯度洗脱

第一节 基本原理  221

一、等度洗脱  221

二、梯度洗脱  222

第二节 影响梯度洗脱的各种因素  224

一、梯度洗脱时间（tG）对分离的影响  224

二、梯度陡度（T）对保留值的影响  224

三、强洗脱溶剂组分B 浓度变化范围（Δφ）的影响  225

四、柱温变化对保留值的影响  227

五、梯度洗脱程序曲线形状的影响  228

六、流动相流速（F）对梯度洗脱的影响  229

七、色谱柱死体积（Vm）对梯度洗脱时间（tG）的影响  231

八、色谱系统的滞留体积（VD）对梯度洗脱时间（tG）的影响  231

第三节 优化梯度洗脱的方法  232

一、建立梯度洗脱方法的一般步骤  232

二、梯度洗脱中的实验条件  234

第四节 梯度洗脱的图示方法  237

一、二元溶剂梯度洗脱  237

二、三元溶剂梯度洗脱  238

三、四元溶剂梯度洗脱  240

四、用极坐标和球面坐标描述梯度洗脱  241

参考文献  243

第八章 高效液相色谱法的基本理论

第一节 表征液相色谱柱填充性能的重要参数  245

一、总孔率  246

二、柱压力降  246

三、柱渗透率  247

第二节 高效液相色谱的速率理论  247

一、影响色谱峰形扩展的各种因素  248

二、范第姆特方程式的表达及图示  251

第三节 诺克斯方程式  252

一、描述色谱柱性能的折合参数  252

二、诺克斯方程式  253

三、诺克斯方程式在表面多孔粒子（SPP）填充色谱柱中的应用  255

第四节 色谱柱的操作参数、“无限直径” 效应和柱外效应  257

一、三个柱操作参数的表达式  257

二、“无限直径”效应  257

三、柱外效应  259

第五节 分离阻抗和动力学图  261

一、分离阻抗  261

二、动力学图  262

第六节 超高效液相色谱  269

一、超高效液相色谱的理论基础  269

二、实现超高效液相色谱的必要条件  271

三、超高效液相色谱的特点、现状及在快速和超快速液

相色谱分析中的应用  277

四、HPLC 和UHPLC 之间的方法转换  284

第七节 高效液相色谱分离条件的优化  291

一、色谱参数的分类  291

二、色谱参数的相关性  291

三、色谱分离条件优化标准的选择  292

四、色谱分离条件的优化方法  293

五、等度洗脱和梯度洗脱的优化图示方法  293

六、优化HPLC 分离条件的计算机辅助方法  296

参考文献  297

第九章 微柱液相色谱法

第一节 方法简介  299

一、微型柱的分类  300

二、微柱液相色谱法的优点和缺点  301

第二节 基本理论  302

一、柱外效应  302

二、管壁效应  305

三、稀释效应  307

四、分离阻抗  308

第三节 仪器装置  308

一、输液泵系统  309

二、进样系统  310

三、柱系统  314

四、检测器系统  315

五、连接管和接头  318

第四节 微柱的制备  319

一、评价微柱性能的重要参数  320

二、影响微柱分离效率的相关参数  321

三、微柱的制备方法  322

第五节 微柱液相色谱的新技术  326

一、纳米液相色谱技术  327

二、填充毛细管柱超高压液相色谱技术  335

参考文献  343

第十章 二维高效液相色谱法

第一节 描述分离体系效能的参数  345

一、峰容量  345

二、信息量  347

第二节 二维高效液相色谱的技术功能  348

一、切割功能  349

二、反冲洗脱功能  350

三、痕量组分的富集功能  350

第三节 二维高效液相色谱的流路系统  350

一、多通路切换阀  351

二、流路系统  351

第四节 二维高效液相色谱在蛋白质组学研究中的应用  357

第五节 二维高效液相色谱在食品分析中的应用  368

一、离线全二维高效液相色谱分析蓝莓中的色素  369

二、在线全二维高效液相色谱分析脂肪酸三甘油酯  370

三、在线全二维高效液相色谱分析红辣胡椒中的类胡萝卜素和

类胡萝卜素酯  371

四、在线全二维高效液相色谱分析天然抗氧化剂中的有效成分  371

参考文献  372

第十一章 高效液相色谱新技术进展

第一节 整体色谱柱  374

一、聚合物整体柱  375

二、硅胶整体柱  378

第二节 绿色流动相  383

一、超热水流动相  384

二、其他绿色流动相  387

第三节 剪切驱动色谱  387

一、仪器构成及操作方法  388

二、固定相、流动相和分析实例  390

第四节 超高效合相色谱  391

一、超高效合相色谱方法原理简介  391

二、超高效合相色谱仪的结构特点  394

三、超高效合相色谱仪的性能特点  398

参考文献  402

第十二章 建立高效液相色谱分析方法的一般步骤和实验技术

第一节 样品的性质及柱分离模式的选择  405

一、样品的溶解度  405

二、样品的分子量范围  406

三、样品的分子结构和分析特性  406

第二节 分离操作条件的选择  412

一、容量因子和死时间的测量  412

二、色谱柱操作参数的选择  413

三、样品组分保留值和容量因子的选择  414

四、相邻组分的选择性系数和分离度的选择  414

第三节 高效液相色谱法的实验技术  416

一、溶剂的纯化技术  416

二、色谱柱的装填技术  416

三、色谱柱的平衡、保护与清洗、再生技术  420

四、梯度洗脱技术  425

五、色谱柱前和柱后的衍生化技术  426

六、样品的预处理技术  428

参考文献  437

符号表  439