《抗体制备与使用实验指南》收集了抗体制备与使用中的基本实验方法及相关的*新科研进展，这些方法是开展抗体制备研究的必备知识，包括鼠源性单克隆抗体的制备、纯化、应用以及抗体的修饰等，同时也包括部分基因重组性单克隆抗体，涉及内容具体、全面，反映了国际上的*新发展方向。
《抗体制备与使用实验指南》对从事生物学、免疫学、生物化学与分子生物学、医药卫生科学领域的科研技术人员，以及高等院校师生具有参考价值。

译者序
前言
第1章 抗体
1.1 一种多功能分子——抗体
1.2 相关伦理思考
1.3 实验室安全
1.4 手册编排
参考文献

第2章 抗原
2.1 抗原的选择
2.2 多肽抗原
2.2.1 多肽抗原的免疫进度表
2.3 蛋白质抗原
2.3.1 原核蛋白
2.3.2 真核蛋白
2.4 全细胞免疫原
2.4.1 全细胞免疫原的免疫方案
2.5 基因免疫
2.5.1 质粒DNA
2.5.2 腺病毒
参考文献

第3章 佐剂
3.1 引言
3.2 佐剂的使用
3.2.1 总体要求
3.2.2 弗氏佐剂的使用
3.2.3 TiterMax佐剂的使用方案
3.2.4 Ribi佐剂系统（RAS）的应用
3.2.5 Gerbu佐剂的应用
3.2.6 Imject铝盐佐剂的使用
参考文献

第4章 多克隆抗体制备
4.1 概要
4.2 抗原提呈细胞
4.2.1 B细胞的抗原识别
4.2.2 T细胞的抗原识别
4.2.3 B细胞受体和抗体产生
4.2.4 免疫记忆
4.2.5 抗体
4.2.6 佐剂的作用
4.2.7 抗原特点
4.2.8 免疫途径
4.2.9 免疫步骤
4.2.10 物种选择
4.3 结论
参考文献

第5章 单克隆抗体的制备
5.1 引言
5.2 材料
5.2.1 免疫原
5.2.2 免疫用的动物
5.2.3 免疫策略
5.3 免疫程序
5.3.1 培养基和骨髓瘤细胞
5.3.2 免疫B细胞的制备
5.3.3 融合和铺板
5.3.4 筛选
5.3.5 亚克隆和低温冻存
5.3.6 杂交瘤细胞的扩增
5.4 结论
参考文献

第6章 单克隆抗体的定量生产
6.1 引言：方法比较
6.2 抗体制备方法概况
6.2.1 产量
6.2.2 费用和设备
6.2.3 动物福利
6.2.4 免疫活性分子污染
6.2.5 微生物污染
6.2.6 抗体糖基化
6.3 腹水的制备
6.3.1 方法概述
6.3.2 免疫原同种异体反应性或异种抗原反应性的对策
6.3.3 体内制备方案：BALB/c小鼠腹水
6.3.4 体内单克隆抗体的制备：通过异种的杂交瘤细胞系制备腹水
6.4 细胞培养制备单克隆抗体
6.4.1 在研究实验室中体外制备单克隆抗体
6.4.2 实验方案：在CELLineCL-1000培养瓶中制备单克隆抗体
6.4.3 用重组和转基因系统制备抗体
6.5 结论
参考文献

第7章 抗体的纯化和鉴定
7.1 引言
7.2 抗体纯化
7.2.1 通过沉淀进行部分纯化
7.2.2 蛋白质A和蛋白质G
7.2.3 IgM和FAB抗体片段的纯化
7.3 抗体的鉴定
7.3.1 区带（醋酸纤维）电泳
7.3.2 通过280nm吸光度测定抗体浓度
7.3.3 SDS-PAGE
7.3.4 免疫印迹
7.3.5 等电聚焦
7.3.6 酶免疫分析
7.4 结语
参考文献

第8章 细菌中制备抗体
8.1 引言
8.2 所需材料
8.3 方法
8.3.1 噬粒设计
8.3.2 文库构建
8.3.3 抗原特异性抗体的筛选
参考文献

第9章 抗体的化学和蛋白水解修饰
9.1 引言
9.2 一般步骤
9.2.1 抗体溶液的稳定性
9.2.2 抗体的定量
9.2.3 抗体的浓缩和缓冲液置换
9.3 胺类的修饰
9.3.1 总体考虑
9.3.2 胺反应试剂的分类
9.3.3 NHS-PEO4-BIOTIN的生物素化反应
9.3.4 用荧光染料进行标记
9.3.5 巯基的导入
9.3.6 聚乙二醇化
9.3.7 与螯合剂的偶合
9.4 巯基和二硫键的修饰
9.4.1 IgG的二硫键和巯基
9.4.2 二硫化物的互换反应
9.4.3 其他涉及巯基和二硫键的氧化-还原试剂
9.4.4 用卤代烃和N-烷基马来酰亚胺进行硫醇的烷基化
9.5 碳水化合物修饰
9.5.1 范例流程10：用NaIO4氧化IgG的碳水化合物部分
9.5.2 范例流程11：DAVLB酰肼与氧化型IgG的偶合
9.6 抗体的固相化
9.6.1 聚苯乙烯培养皿和ELISA孔的固相化
9.6.2 与亲和介质的共价偶合
9.6.3 经生物素介导与亲和介质的固相化
9.7 蛋白的水解修饰
9.7.1 木瓜蛋白酶水解兔IgG制备Fab片段
9.8 抗体与其他蛋白质的交联
9.8.1 范例流程18：肼与IgG氨基的交联
9.8.2 范例流程19：醛与另一个蛋白质氨基的交联
9.8.3 范例流程20：MEHN-IgG与FB-蛋白质的交联
参考文献

第10章 抗体的应用
10.1 引言
10.2 蛋白质转印
10.2.1 转印设备
10.2.2 转印缓冲液
10.2.3 条件的优化
10.2.4 转印膜
10.3 检测
10.3.1 蛋白质印迹的直接染色
10.3.2 抗原的检测
10.3.3 蛋白质免疫印迹的检测抗体
10.3.4 免疫印迹实验中抗体的替代品
10.3.5 蛋白质免疫印迹的定量
10.3.6 相对分子质量标准品
……
第11章 免疫组织化学法
第12章 免疫电子显微镜
第13章 流式细胞术
第14章 酶联免疫吸附试验
第15章 抗体的未来：挑战与机遇
索引
彩图

2.2多肽抗原
多肽无疑是生产抗原的*快方式，可用于免疫接种来制备抗体。许多机构和公司发现保持核心多肽合成的能力经济有效。如果不具备多肽合成能力，一些商业公司提供多肽合成定制服务。这种方法可靠、经济，可在几周之内提供高质量的多肽，其数量足以用于免疫接种。对于典型的多肽免疫原，大约500美元可以买到10mg含15个氨基酸并且纯度>80％的多肽（circa 2005），这些多肽足够免疫几个动物来得到抗体，并用酶联免疫吸附试验进行抗体筛选。
多肽可以特别有效地提高抗体对抗原某区域的特异性，如新的结构域或同源性*低的区域。当抗原没有其他来源的时候，也可使用多肽。许多情况下，重组蛋白因为不能被表达和纯化而不能作为抗原的来源。对于大分子跨膜蛋白，如G蛋白偶联受体（在制药领域重要的分子家族）来说这是经常发生的，对应胞外结构域蛋白环状结构的短肽已被证明是可行的免疫原，可以产生针对这些复杂分子的抗体。
由6个氨基酸组成的肽可以用来制备抗血清，由10～12个氨基酸残基组成的多肽通常有更高的免疫原性[2]。一个较短的抗原表位的例子是Flag标签，其在蛋白质纯化、鉴定和功能分析领域被广泛使用。这是一个八肽序列（DYKDDDDK），其单克隆抗体和多克隆抗体很容易买到。我们发现由12～15个氨基酸组成的多肽在多数情况下都是非常好的免疫原。由30～35个氨基酸组成的较长多肽，虽然本身化学合成受限，但也是非常好的免疫原，其优点是可能会形成相关的二级结构。多肽免疫原使用受限是因为其线性表位序列短，在一个完整的蛋白质抗原中不易被识别。因而由多肽产生的抗体趋向于识别线性表位，总的来说，在免疫印迹实验和其他识别变性蛋白的抗体实验中效果非常好。然而，由多肽产生的抗体通常不能识别蛋白质构象，因此不太可能和天然分子反应。这样的抗体往往没有功能，不能用于流式细胞仪。但是应该指出的是，在有些情况下多肽免疫原确实能够生成能识别天然蛋白质的抗体。例如，当蛋白质抗原的线性表位没有被其三级结构所掩盖的时候。