干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下可以分化成多种功能细胞，被视为21 世纪的医学革命，是全球生命科学领域最重要的前沿技术之一。本书共6章，重点介绍干细胞的特征原理、法规制度、临床应用、质量安全等内容，总结梳理了干细胞在不同疾病临床治疗中的应用效果，详细分析了干细胞在研发使用过程中存在的安全性和有效性问题，以期对相关研发、研究、监管、使用等人员提供有益的参考。

第一章　总述 …………………………………………………………………1

第一节　干细胞概述 ……………………………………………………… 1

第二节　干细胞法规监管概述 …………………………………………… 2

第三节　干细胞临床治疗展望 …………………………………………… 3

第二章　干细胞基础知识 …………………………………………………5

第一节　干细胞相关知识简介 …………………………………………… 5

一、干细胞基本特性 ………………………………………………… 5

二、干细胞分类 ……………………………………………………… 7

三、干细胞调控和分化 ……………………………………………… 8

四、干细胞伦理考虑 ……………………………………………… 11

五、干细胞临床治疗应用和限制 ………………………………… 12

第二节　核克隆、表观遗传重编程和细胞分化 ……………………… 15

一、核克隆 ………………………………………………………… 15

二、表观遗传重编程 ……………………………………………… 16

三、细胞分化 ……………………………………………………… 18

第三节　胚胎干细胞 …………………………………………………… 20

一、胚胎干细胞基础 ……………………………………………… 20

二、胚胎干细胞临床应用 ………………………………………… 25

三、伦理道德争议 ………………………………………………… 27

第四节　心脏干细胞与心肌再生 ……………………………………… 30

目 录CONTENTS

干细胞临床应用与质量安全

2

一、心脏干细胞基础 ……………………………………………… 30

二、心脏干细胞用于心肌再生 …………………………………… 31

第三章　干细胞临床应用 ……………………………………………… 37

第一节　间充质干细胞治疗炎症性肠病 ……………………………… 37

一、炎症性肠病介绍及治疗 ……………………………………… 37

二、临床应用 ……………………………………………………… 37

三、作用机制 ……………………………………………………… 38

四、安全考虑 ……………………………………………………… 40

第二节　干细胞治疗多发性硬化症 …………………………………… 42

一、多发性硬化症介绍 …………………………………………… 42

二、临床应用 ……………………………………………………… 42

三、作用机制 ……………………………………………………… 43

四、安全考虑 ……………………………………………………… 45

第三节　干细胞外泌体用于细胞再生与修复 ………………………… 47

一、干细胞外泌体 ………………………………………………… 47

二、临床应用 ……………………………………………………… 48

三、安全考虑 ……………………………………………………… 53

第四节　干细胞外泌体用于无细胞再生医学治疗 …………………… 53

一、无细胞再生医学治疗 ………………………………………… 53

二、临床应用 ……………………………………………………… 55

三、安全考虑 ……………………………………………………… 59

第五节　肿瘤干细胞及其在肿瘤免疫治疗中的应用 ………………… 60

一、肿瘤干细胞 …………………………………………………… 60

二、临床应用 ……………………………………………………… 62

三、安全考虑 ……………………………………………………… 64

第六节　间充质干细胞作为癌症治疗载体 …………………………… 65

一、作用机制 ……………………………………………………… 65

3

目　录

二、临床应用 ……………………………………………………… 67

三、安全考虑 ……………………………………………………… 68

第七节　干细胞在遗传疾病治疗中的应用 …………………………… 70

一、遗传疾病介绍及治疗 ………………………………………… 70

二、临床应用 ……………………………………………………… 72

三、安全考虑 ……………………………………………………… 74

第八节　间充质干细胞治疗自身免疫病的机制 ……………………… 74

一、自身免疫病介绍 ……………………………………………… 74

二、临床应用及作用机制 ………………………………………… 75

三、安全考虑 ……………………………………………………… 78

第九节　间充质干细胞用于系统性红斑狼疮免疫治疗 ……………… 79

一、系统性红斑狼疮介绍及治疗 ………………………………… 79

二、临床应用 ……………………………………………………… 80

三、作用机制 ……………………………………………………… 82

四、安全考虑 ……………………………………………………… 86

第十节　干细胞在心肌病治疗中的应用 ……………………………… 87

一、心肌病介绍及治疗 …………………………………………… 87

二、临床应用 ……………………………………………………… 88

三、作用机制 ……………………………………………………… 91

四、安全考虑 ……………………………………………………… 93

第十一节　干细胞用于神经退行性疾病 ……………………………… 94

一、神经退行性疾病介绍及治疗 ………………………………… 94

二、临床应用及作用机制 ………………………………………… 94

三、安全考虑 ……………………………………………………… 101

第十二节　干细胞在神经细胞和肌肉细胞修复治疗中的应用 ……… 101

一、细胞修复治疗 ………………………………………………… 101

二、临床应用 ……………………………………………………… 102

三、作用机制 ……………………………………………………… 105

四、安全考虑 ……………………………………………………… 106

干细胞临床应用与质量安全

4

第十三节　干细胞干预新冠肺炎临床研究 …………………………… 106

一、新型冠状病毒肺炎介绍 ……………………………………… 106

二、干细胞干预新冠肺炎具有良好的安全性和有效性 ………… 107

三、干细胞修复新冠肺炎引发肺脏损伤的机制 ………………… 108

四、干细胞治疗新冠肺炎的展望 ………………………………… 111

第四章　干细胞质量控制 ……………………………………………… 115

第一节　干细胞质量控制与标准化研究 ……………………………… 115

一、国际标准ISO 24603中干细胞质量安全检查项目 ………… 115

二、国家标准与全国团体标准中干细胞质量安全检查项目 …… 127

第二节　人类干细胞研究的伦理与法律问题 ………………………… 128

一、干细胞国内外发展现状 ……………………………………… 128

二、干细胞研究的伦理问题 ……………………………………… 128

三、国内干细胞监管法律变化 …………………………………… 131

四、干细胞应用的未来 …………………………………………… 133

第五章　肿瘤干细胞疫苗 ……………………………………………… 140

第一节　肿瘤干细胞疫苗的研发与临床应用 ………………………… 140

一、肿瘤干细胞疫苗研发 ………………………………………… 140

二、干细胞疫苗临床应用 ………………………………………… 144

三、安全考虑 ……………………………………………………… 145

第二节　疫苗生产工艺关键控制点 …………………………………… 146

一、生产质量控制策略 …………………………………………… 146

二、上游生产工艺控制 …………………………………………… 148

三、下游生产工艺控制 …………………………………………… 151

第三节　重组蛋白疫苗成品指标检测 ………………………………… 154

一、鉴别试验——酶联免疫吸附法 ……………………………… 154

二、铝含量——氢氧化铝（或磷酸铝）测定法 …………………… 155

5

目　录

三、游离甲醛含量——紫外-可见分光光度法 ………………… 156

四、效价测定——酶联免疫法 …………………………………… 157

五、异常毒性检查——豚鼠法和小鼠法 ………………………… 159

六、细菌内毒素检查——凝胶法 ………………………………… 160

七、抗生素残留量——间接竞争ELISA法 ……………………… 162

第四节　核酸类疫苗成品指标检测 …………………………………… 164

鉴别 …………………………………………………………………… 164

一、mRNA序列尺寸 ……………………………………………… 164

二、序列测定——NGS法 ………………………………………… 166

物理检查 ……………………………………………………………… 172

三、可见异物——《中国药典》2020年版三部通则0904

　　可见异物检查法第一法（灯检法） …………………………… 172

四、不溶性微粒——《中国药典》2020年版三部通则0903

　　不溶性微粒检查法第一法（光阻法） ………………………… 174

五、粒径及PDI——《中国药典》2020年版三部通则0982

　　粒度和粒度分布测定法第三法（光散射法） ………………… 176

化学检定 ……………………………………………………………… 177

六、Zeta电位 ……………………………………………………… 177

七、包封率 ………………………………………………………… 178

八、mRNA纯度 …………………………………………………… 180

九、RNA浓度——《中国药典》2020年版三部通则0401

　　紫外-可见分光光度法 ……………………………………… 182

十、蔗糖含量——高效液相色谱法 ……………………………… 183

十一、脂质含量——高效液相色谱法 …………………………… 185

十二、乙醇残留量 ………………………………………………… 187

十三、脂质杂质——高效液相色谱法 …………………………… 188

生物学活性 …………………………………………………………… 189

十四、生物学活性——ELISA法 …………………………………… 189

干细胞临床应用与质量安全

6

细菌内毒素 …………………………………………………………… 191

十五、细菌内毒素——动态显色法 ……………………………… 191

第五节　新型疫苗成品通用指标检测 ………………………………… 193

一、外观——目视法 ……………………………………………… 193

二、装量——重量法和容量法 …………………………………… 194

三、渗透压摩尔浓度——冰点下降法 …………………………… 196

四、pH值——电位法 ……………………………………………… 197

五、无菌检查——无菌检查法 …………………………………… 199

第六章　展望 ……………………………………………………………… 205

第一节　干细胞临床应用领域的展望 ………………………………… 206

第二节　疫苗发展情况的展望 ………………………………………… 208

附录 …………………………………………………………………………… 209

附录1 细胞存活率检测　细胞计数法 ………………………………… 209

附录2 细胞标志蛋白检测免疫荧光染色计数法（仲裁法） ………… 211

附录3 细胞标志蛋白检测流式细胞术 ………………………………… 213

附录4 无菌检查法 ……………………………………………………… 215

附录5 支原体检查法 …………………………………………………… 218

附录6 HIV核酸检测法 ………………………………………………… 221

附录7 HBV检查 ………………………………………………………… 224

附录8 HCV检查 ………………………………………………………… 226

附录9 HCMV检查 ……………………………………………………… 228

附录10 国际标准ISO 24603：2022 人和小鼠多能性干细胞通用

　　　　 要求 …………………………………………………………… 230

附录11 GB/T 40365—2021 细胞无菌检测通则 ………………… 257

附录12 GB/T 38788—2020 猪多能干细胞建系技术规范 ……… 261