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书名：病原生物与免疫学实验
定价：49.8
ISBN：9787030556479
作者：无
版次：1
出版时间：2018-07
内容提要：
本实验教材包括医学微生物学实验、人体寄生虫学实验和医学免疫学实验，实验项目分为：常用实验仪器设备与动物实验技术介绍；基础性实验；综合性实验；创新性实验四部分。实验内容丰富而又实用；对学科间有交叉重复的内容进行了适当的整合优选，避免教学资源的浪费；三门学科的实验均独自成篇，方便实验教学需要。全书还以二维码的方式展示了线上数字化资源 200 余个，充分拓展教学内容，打造立体阅读体验，创新实验教材模式。
目录：
目录
第1篇 总论
第1章 绪论 1
第1节 病原生物与免疫学实验的目的和要求 1
第2节 病原生物与免疫学实验室规则 1
第3节 实验室生物安全 2
第2章 常用实验仪器设备 4
第1节 显微镜 4
第2节 培养箱 8
第3节 离心机 11
第4节 电热恒温干燥箱 12
第5节 高压蒸汽灭*器 13
第6节 滤菌器 14
第7节 超净工作台 15
第8节 生物安全柜 16
第9节 微量移液器 18
第10节 电泳设备 19
第11节 分光光度计 22
第12节 酶标仪 23
第13节 PCR仪 25
第14节 流式细胞仪 27
第15节 全自动微生物鉴定仪 30
第3章 动物实验技术 32
第1节 实验动物的种类与选择 32
第2节 实验动物的接种 33
第3节 实验动物的采血 34
第4节 实验动物的解剖 36
第2篇 基础性实验
第4章 医学微生物学实验 38
实验1 细菌的形态结构观察 38
实验2 活菌运动观察 39
实验3 细菌标本的染色检查 40
实验4 基础培养基的制备 45
实验5 细菌的接种 46
实验6 细菌的生化反应 49
实验7 细菌的分布 52
实验8 消毒与灭* 55
实验9 细菌内毒素测定——鲎试验 58
实验10 药物敏感试验 59
实验11 其他原核细胞型微生物的 形态结构观察 60
实验12 病毒的形态结构观察 62
实验13 病毒血凝和血凝抑制试验 64
实验14 真菌的形态结构观察 66
第5章 人体寄生虫学实验 68
实验1 叶足虫 68
实验2 鞭毛虫 69
实验3 孢子虫、纤毛虫 71
实验4 线虫 76
实验5 吸虫 84
实验6 绦虫 90
实验7 昆虫纲 95
实验8 蛛形纲 100
第6章 医学免疫学实验 102
实验1 凝集反应 102
实验2 沉淀反应 109
实验3 补体测定技术 114
实验4 免疫标记技术 116
实验5 吞噬细胞功能测定 121
实验6 外周血单个核细胞（PBMC） 分离方法 123
实验7 E-玫瑰花环形成实验 124
第3篇 综合性实验
第7章 医学微生物学实验 127
实验1 水的卫生细菌学检验 127
实验2 脓汁标本中病原菌的分离 鉴定 129
实验3 粪便标本中病原菌的分离 鉴定 133
实验4 药物微生物限度检查 135
实验5 病毒的鸡胚培养法 138
实验6 乙型肝炎病毒抗原抗体检 测-ELISA 140
实验7 PCR检测支原体 141
实验8 皮肤真菌的检查 142
第8章 人体寄生虫学实验 144
实验1 实验动物兔人工感染日本血 吸虫实验 144
实验2 环卵沉淀试验（COPT） 144
实验3 食用猪肉和淡水鱼的寄生虫 学检疫 145
实验4 人体感染蠕形螨的检查 146
第9章 医学免疫学实验 148
实验1 T淋巴细胞免疫功能的检测 148
实验2 B淋巴细胞免疫功能的检测 150
实验3 多克隆抗体的制备与检测 151
实验4 超敏反应检测技术 153
实验5 细胞因子检测 157
实验6 流式细胞测定术 161
第4篇 创新性实验
第10章 创新性实验基本知识 163
第1节 创新性实验的选题 163
第2节 创新性实验完成的基本步骤 164
第3节 创新性实验注意事项 170
第4节 创新性实验参考选题 171
第11章 医学微生物学实验 172
虚拟仿真实验——细菌的接种 172
第12章 人体寄生虫学实验 177
市售蔬菜寄生虫卵污染情况调查 177
第13章 医学免疫学实验 178
实验1 类风湿关节炎患者免疫功能的检测 178
实验2 支气管哮喘外周血中Micro RNA的表达及其临床意义 179
实验3 Toll样受体7（TLR-7）在结核分枝杆菌感染中的作用 179
实验4 PD-1/PD-L1信号通路在CTL抗肿瘤中的作用 180
实验5 IL-17在痛风性关节炎病理中的作用 180
参考文献 182
附录 183
附录1 菌种保藏 183
附录2 常用培养基 184
附录3 实验报告的书写 186
中英文名词对照索引 189
在线试读：
第1篇 总论
第1章 绪论
第1节 病原生物与免疫学实验的目的和要求
一、病原生物与免疫学实验的目的
（1）加深和巩固学生对病原生物与免疫学理论知识的理解。
（2）通过实验训练，掌握病原生物与免疫学的基本实践操作技能。
（3）培养学生观察问题、思考问题、分析问题、提出问题和解决问题的能力。
（4）养成实事求是、严谨认真的科学态度和敢于创新的开拓精神。
二、病原生物与免疫学实验课要求
（1）实验前仔细阅读实验指导，对实验内容进行充分预习，了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。
（2）遵守实验室规则和各项操作规程，养成“无菌”观念，掌握无菌操作技术。
（3）认真听取指导老师实验前的讲解和示教。
（4）积极动手，细心操作，既重视独立操作，又注重小组分工合作。
（5）及时、认真观察实验结果，实事求是地记录在实验报告中，如实验结果与理论不符，应探讨其原因。
（6）认真完成实验报告，并针对老师批改意见及时订正。
第2节 病原生物与免疫学实验室规则
病原生物与免疫学实验室是病原生物高度集中的场所，其实验研究对象以病原微生物、人体寄生虫及各种抗原、抗体为主，标本常具有一定传染性。为防止感染自身和扩散传播，要求学生进入实验室必须严格遵守以下规则。
（1）进入实验室前将与实验无关物品存放于存包柜中，不得将实验无关物品带入实验室。未经许可，不得将实验室内物品（特别是菌种）带出室外。
（2）进入实验室要穿隔离衣（离开时反折），必要时要戴帽子、手套和口罩，按座位上学号就座，实验前做好各项准备工作。
（3）实验课中不准随意出进，保持实验室安静，实验室内禁止饮食、吸烟等。
（4）实验中坚持无菌操作，不仅要防止临床标本及纯培养物被污染，更要防止临床标本或纯培养物中的病原微生物感染实验者或污染环境。
（5）用过的吸管、滴管、试管、玻片等带菌器材，应放到指定的地点或含消毒液的容器内，经专人消毒灭*之后再进行清洗，切勿乱丢或冲入水池中。需送培养箱培养的物品，应标记清楚后按要求放置。
（6）若发生割破手指，菌液进入口、眼，或遇带菌材料破损，污染环境、物品等事故时，应立即报告老师，及时进行妥善处理。
（7）不可擅自搬动示教器材和室内设施。爱护公物，节约使用实验材料。如有损坏，应立即向指导教师报告，主动在破损物品登记本上登记，某些物品需按规定酌情赔偿。
（8）注意防火，火源不要接近易燃物品（如棉塞、乙醇、二甲苯等），切忌以酒精灯倾斜引火，用毕立即熄灭。
（9）实验完毕后应将桌面整理清洁，试剂、仪器放回原处，每次实验后，安排值日学生进行桌面、地面卫生清洁工作，凳椅排列整齐；检查门、窗、水、电、火。
（10）离开实验室前脱下工作服，反折放在指定的地方；用消毒液泡手或用肥皂洗手后方可离开实验室。
第3节 实验室生物安全
生物安全（biosafety）一般是指由现代生物技术开发和应用所能造成的对生态环境和人体健康产生的潜在威胁，以及对其所采取的一系列有效预防和控制措施。
实验室生物安全（laboratory biosafety）是指在从事病原微生物实验活动的实验室中为避免病原微生物对工作人员、相关人员、公众的危害及对环境的污染，保证实验研究的科学性或保护被试验因子免受污染，而采取包括建立规范的管理体系，配备必要的物理、生物防护设施和设备，建立规范的微生物操作技术和方法等综合措施。
一、病原微生物的分类
根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，我国将病原微生物分为以下四类。
第*类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。
第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。
第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治*及预防措施的微生物。
第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。
第*类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。
二、生物安全实验室的分级
我国根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将生物安全级别（biosafety level，BSL）分为四级（表1-1），以Ⅰ级防护水平*低，Ⅳ级防护水平*高。以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示实验室的相应生物安全防护水平。病原微生物学教学实验通常要求在BSL-1和BSL-2实验室开展。
表1-1 生物安全实验室的分级
三、实验室感染的控制
实验室感染的控制工作包括定期检查实验室的生物安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本的保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和废气，以及其他废物处置等规章制度的实施情况。
实验室发生高致病性病原微生物泄漏时，实验室工作人员应当立即采取控制措施，防止高致病性病原微生物扩散，并同时向负责实验室感染控制工作的机构或者人员报告。具体措施包括：①封闭被病原微生物污染的实验室或者可能造成病原微生物扩散的场所；②开展流行病学调查；③对患者进行隔离治*，对相关人员进行医学检查；④对密切接触者进行医学观察；⑤进行现场消毒；⑥对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施；⑦其他需要采取的预防、控制措施。
（王家学 潘丽红）
第2章 常用实验仪器设备
第1节 显微镜
显微镜（microscope）是一种光学放大仪器，其作用是将观察的标本放大，以便观察和分析。在病原生物与免疫学实验中用于观察细菌、病毒、真菌、寄生虫、免疫细胞、抗原和抗体等，根据实验要求的不同，选择功能不同的显微镜进行观察，如普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜等，*常用的是普通光学显微镜。
一、显微镜的种类
（一）光学显微镜（light microscope）
普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。显微镜的分辨率为波长的1/2，即0.2μm，而肉眼可见的*小形象为0.2mm。故用油（浸）镜放大1000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
（二）暗视野显微镜（dark field microscope）
暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接收从聚光器边缘斜射光后可发生散射。因此，可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
（三）相差显微镜（phase contrast microscope）
相差显微镜利用相差板的光栅作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
（四）荧光显微镜（fluorescence microscope）
荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。目前大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。滤光片有激发滤光片和吸收滤光片两种。用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。本法适用于荧光色素染色或与荧光抗体结合的细菌的检测或鉴定。
（五）电子显微镜（electron microscope）
电子显微镜用电子流作为光源，波长与可见光相比差几万倍，大大提高了分辨力，并用磁性电圈作为光学放大系统，放大倍数可达数万倍或几十万倍，常用于病毒颗粒和细菌超微结构的观察。常用的电镜有透射电镜和扫描电镜两种。透射电镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万至几十万倍，需要制备厚度为50～100nm的超薄切片。扫描电镜能显示物体表面的立体构象，且图像富有立体感。
（六）数码显微互动系统（digital microscopic interaction system）
数码显微互动系统包括显微镜系统、计算机软件系统、图像处理系统及语音问答系统四部分。数码显微互动系统是将数码显微镜和计算机网络集成，构成一个可以双向互动的多媒体教学系统。组成特点：显微数码系统内置式、多画面实时显示、可选择式多向语音问答系统及交谈式显微镜LED指针系统；教师端采用的系统由带有320万以上像素CCD摄像机的显微镜和一台高性能的PC机构成，每个学生端采用的系统由约200万像素的CMOS摄像机和一台普通PC机组成。这些PC机通过一个100M以太网互联，达到相互通信和传输图像数据的目的，工作原理见图2-1。
图2-1 数码显微互动系统工作原理
数码显微镜互动系统具有图像更清晰、操作更简便、功能更强大的特点。其教师端和学生端均有本地操作、远程操作的功能。教师可实时观察到课堂上每个学生的显微镜画面，及时发现实验中存在的问题并指导学生改正。学生也可以随时通过单通道的提问系统请求老师示教，并利用显微镜LED指针与老师交流讨论，并可与小组同学进行讨论而不影响小组外成员，使得师生间可实现图像、语音的网络互动，交流更加直观、有效。
二、普通光学显微镜的构造
普通光学显微镜按照镜筒分为单筒、双筒、多头显微镜，按光源可分为反光镜光源与自带光源显微镜等几种，其基本结构相似（图2-2），包括机械装置和光学系统两大部分。
（一）机械装置
（1）镜座是显微镜的底座，用以支持整个镜体。
（2）镜柱是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。
（3）镜臂一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。
图2-2 普通光学显微镜的基本结构
（4）镜筒连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。
（5）物镜转换器又称为旋转盘，位于镜筒下端的一个可旋转的凹形圆盘上，一般装有2～4个放大倍数不同的物镜。旋转它就可以转换物镜。当听到“咔”的响声时，方可观察玻片标本。
（6）载物台又称为镜台，在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器（推片器），推进器左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本做左右、前后方向的移动。
（7）调节器是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台做上下方向的移动。
1）粗准焦螺旋（粗螺旋）：大螺旋称粗螺旋，移动时可使镜台快速和较大幅度地升降，所以能迅速调节物镜和标本之间的距离使物像呈现于视野中，通常在使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物像。
2）细准焦螺旋（细螺旋）：小螺旋称细螺旋，移动时可使镜台缓慢地升降，多在运用高倍镜时使用，从而得到更清晰的物像，并借以观察标本的不同层次和不同深度的结构。
（二）光学系统
（1）目镜：装在镜筒的上端，通常备有2～3个，上面刻有“5×”、“10×”或“15×”符号以表示其放大倍数，一般装的是“10×”的目镜。
（2）物镜：装在镜筒下端的旋转器上，一般有3～4个物镜，其中*短的刻有“10×”符号的为低倍镜，较长的刻有“40×”符号的为高倍镜，*长的刻有“100×”符号的为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为“10×”，目镜为“10×”，其放大倍数就为10×10=100。
（3）聚光器：位于载物台通光孔的下方，由聚光镜和光圈组成，其作用是把光线集中到所要观察的标本上。①聚光镜：由一片或数片透镜组成，起汇聚光线的作用，加强对标本的照明，并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调节螺旋，转动它可升降聚光器，以调节视野中光亮度的强弱。②光圈：也称为虹彩光圈或孔径光阑，在聚光镜下方，由十几张金属薄片组成，其外侧伸出一柄，推动它可
定价：49.8
ISBN：9787030556479
作者：无
版次：1
出版时间：2018-07
内容提要：
本实验教材包括医学微生物学实验、人体寄生虫学实验和医学免疫学实验，实验项目分为：常用实验仪器设备与动物实验技术介绍；基础性实验；综合性实验；创新性实验四部分。实验内容丰富而又实用；对学科间有交叉重复的内容进行了适当的整合优选，避免教学资源的浪费；三门学科的实验均独自成篇，方便实验教学需要。全书还以二维码的方式展示了线上数字化资源 200 余个，充分拓展教学内容，打造立体阅读体验，创新实验教材模式。
目录：
目录
第1篇 总论
第1章 绪论 1
第1节 病原生物与免疫学实验的目的和要求 1
第2节 病原生物与免疫学实验室规则 1
第3节 实验室生物安全 2
第2章 常用实验仪器设备 4
第1节 显微镜 4
第2节 培养箱 8
第3节 离心机 11
第4节 电热恒温干燥箱 12
第5节 高压蒸汽灭*器 13
第6节 滤菌器 14
第7节 超净工作台 15
第8节 生物安全柜 16
第9节 微量移液器 18
第10节 电泳设备 19
第11节 分光光度计 22
第12节 酶标仪 23
第13节 PCR仪 25
第14节 流式细胞仪 27
第15节 全自动微生物鉴定仪 30
第3章 动物实验技术 32
第1节 实验动物的种类与选择 32
第2节 实验动物的接种 33
第3节 实验动物的采血 34
第4节 实验动物的解剖 36
第2篇 基础性实验
第4章 医学微生物学实验 38
实验1 细菌的形态结构观察 38
实验2 活菌运动观察 39
实验3 细菌标本的染色检查 40
实验4 基础培养基的制备 45
实验5 细菌的接种 46
实验6 细菌的生化反应 49
实验7 细菌的分布 52
实验8 消毒与灭* 55
实验9 细菌内毒素测定——鲎试验 58
实验10 药物敏感试验 59
实验11 其他原核细胞型微生物的 形态结构观察 60
实验12 病毒的形态结构观察 62
实验13 病毒血凝和血凝抑制试验 64
实验14 真菌的形态结构观察 66
第5章 人体寄生虫学实验 68
实验1 叶足虫 68
实验2 鞭毛虫 69
实验3 孢子虫、纤毛虫 71
实验4 线虫 76
实验5 吸虫 84
实验6 绦虫 90
实验7 昆虫纲 95
实验8 蛛形纲 100
第6章 医学免疫学实验 102
实验1 凝集反应 102
实验2 沉淀反应 109
实验3 补体测定技术 114
实验4 免疫标记技术 116
实验5 吞噬细胞功能测定 121
实验6 外周血单个核细胞（PBMC） 分离方法 123
实验7 E-玫瑰花环形成实验 124
第3篇 综合性实验
第7章 医学微生物学实验 127
实验1 水的卫生细菌学检验 127
实验2 脓汁标本中病原菌的分离 鉴定 129
实验3 粪便标本中病原菌的分离 鉴定 133
实验4 药物微生物限度检查 135
实验5 病毒的鸡胚培养法 138
实验6 乙型肝炎病毒抗原抗体检 测-ELISA 140
实验7 PCR检测支原体 141
实验8 皮肤真菌的检查 142
第8章 人体寄生虫学实验 144
实验1 实验动物兔人工感染日本血 吸虫实验 144
实验2 环卵沉淀试验（COPT） 144
实验3 食用猪肉和淡水鱼的寄生虫 学检疫 145
实验4 人体感染蠕形螨的检查 146
第9章 医学免疫学实验 148
实验1 T淋巴细胞免疫功能的检测 148
实验2 B淋巴细胞免疫功能的检测 150
实验3 多克隆抗体的制备与检测 151
实验4 超敏反应检测技术 153
实验5 细胞因子检测 157
实验6 流式细胞测定术 161
第4篇 创新性实验
第10章 创新性实验基本知识 163
第1节 创新性实验的选题 163
第2节 创新性实验完成的基本步骤 164
第3节 创新性实验注意事项 170
第4节 创新性实验参考选题 171
第11章 医学微生物学实验 172
虚拟仿真实验——细菌的接种 172
第12章 人体寄生虫学实验 177
市售蔬菜寄生虫卵污染情况调查 177
第13章 医学免疫学实验 178
实验1 类风湿关节炎患者免疫功能的检测 178
实验2 支气管哮喘外周血中Micro RNA的表达及其临床意义 179
实验3 Toll样受体7（TLR-7）在结核分枝杆菌感染中的作用 179
实验4 PD-1/PD-L1信号通路在CTL抗肿瘤中的作用 180
实验5 IL-17在痛风性关节炎病理中的作用 180
参考文献 182
附录 183
附录1 菌种保藏 183
附录2 常用培养基 184
附录3 实验报告的书写 186
中英文名词对照索引 189
在线试读：
第1篇 总论
第1章 绪论
第1节 病原生物与免疫学实验的目的和要求
一、病原生物与免疫学实验的目的
（1）加深和巩固学生对病原生物与免疫学理论知识的理解。
（2）通过实验训练，掌握病原生物与免疫学的基本实践操作技能。
（3）培养学生观察问题、思考问题、分析问题、提出问题和解决问题的能力。
（4）养成实事求是、严谨认真的科学态度和敢于创新的开拓精神。
二、病原生物与免疫学实验课要求
（1）实验前仔细阅读实验指导，对实验内容进行充分预习，了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。
（2）遵守实验室规则和各项操作规程，养成“无菌”观念，掌握无菌操作技术。
（3）认真听取指导老师实验前的讲解和示教。
（4）积极动手，细心操作，既重视独立操作，又注重小组分工合作。
（5）及时、认真观察实验结果，实事求是地记录在实验报告中，如实验结果与理论不符，应探讨其原因。
（6）认真完成实验报告，并针对老师批改意见及时订正。
第2节 病原生物与免疫学实验室规则
病原生物与免疫学实验室是病原生物高度集中的场所，其实验研究对象以病原微生物、人体寄生虫及各种抗原、抗体为主，标本常具有一定传染性。为防止感染自身和扩散传播，要求学生进入实验室必须严格遵守以下规则。
（1）进入实验室前将与实验无关物品存放于存包柜中，不得将实验无关物品带入实验室。未经许可，不得将实验室内物品（特别是菌种）带出室外。
（2）进入实验室要穿隔离衣（离开时反折），必要时要戴帽子、手套和口罩，按座位上学号就座，实验前做好各项准备工作。
（3）实验课中不准随意出进，保持实验室安静，实验室内禁止饮食、吸烟等。
（4）实验中坚持无菌操作，不仅要防止临床标本及纯培养物被污染，更要防止临床标本或纯培养物中的病原微生物感染实验者或污染环境。
（5）用过的吸管、滴管、试管、玻片等带菌器材，应放到指定的地点或含消毒液的容器内，经专人消毒灭*之后再进行清洗，切勿乱丢或冲入水池中。需送培养箱培养的物品，应标记清楚后按要求放置。
（6）若发生割破手指，菌液进入口、眼，或遇带菌材料破损，污染环境、物品等事故时，应立即报告老师，及时进行妥善处理。
（7）不可擅自搬动示教器材和室内设施。爱护公物，节约使用实验材料。如有损坏，应立即向指导教师报告，主动在破损物品登记本上登记，某些物品需按规定酌情赔偿。
（8）注意防火，火源不要接近易燃物品（如棉塞、乙醇、二甲苯等），切忌以酒精灯倾斜引火，用毕立即熄灭。
（9）实验完毕后应将桌面整理清洁，试剂、仪器放回原处，每次实验后，安排值日学生进行桌面、地面卫生清洁工作，凳椅排列整齐；检查门、窗、水、电、火。
（10）离开实验室前脱下工作服，反折放在指定的地方；用消毒液泡手或用肥皂洗手后方可离开实验室。
第3节 实验室生物安全
生物安全（biosafety）一般是指由现代生物技术开发和应用所能造成的对生态环境和人体健康产生的潜在威胁，以及对其所采取的一系列有效预防和控制措施。
实验室生物安全（laboratory biosafety）是指在从事病原微生物实验活动的实验室中为避免病原微生物对工作人员、相关人员、公众的危害及对环境的污染，保证实验研究的科学性或保护被试验因子免受污染，而采取包括建立规范的管理体系，配备必要的物理、生物防护设施和设备，建立规范的微生物操作技术和方法等综合措施。
一、病原微生物的分类
根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，我国将病原微生物分为以下四类。
第*类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。
第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。
第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治*及预防措施的微生物。
第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。
第*类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。
二、生物安全实验室的分级
我国根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将生物安全级别（biosafety level，BSL）分为四级（表1-1），以Ⅰ级防护水平*低，Ⅳ级防护水平*高。以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示实验室的相应生物安全防护水平。病原微生物学教学实验通常要求在BSL-1和BSL-2实验室开展。
表1-1 生物安全实验室的分级
三、实验室感染的控制
实验室感染的控制工作包括定期检查实验室的生物安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本的保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和废气，以及其他废物处置等规章制度的实施情况。
实验室发生高致病性病原微生物泄漏时，实验室工作人员应当立即采取控制措施，防止高致病性病原微生物扩散，并同时向负责实验室感染控制工作的机构或者人员报告。具体措施包括：①封闭被病原微生物污染的实验室或者可能造成病原微生物扩散的场所；②开展流行病学调查；③对患者进行隔离治*，对相关人员进行医学检查；④对密切接触者进行医学观察；⑤进行现场消毒；⑥对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施；⑦其他需要采取的预防、控制措施。
（王家学 潘丽红）
第2章 常用实验仪器设备
第1节 显微镜
显微镜（microscope）是一种光学放大仪器，其作用是将观察的标本放大，以便观察和分析。在病原生物与免疫学实验中用于观察细菌、病毒、真菌、寄生虫、免疫细胞、抗原和抗体等，根据实验要求的不同，选择功能不同的显微镜进行观察，如普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜等，*常用的是普通光学显微镜。
一、显微镜的种类
（一）光学显微镜（light microscope）
普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。显微镜的分辨率为波长的1/2，即0.2μm，而肉眼可见的*小形象为0.2mm。故用油（浸）镜放大1000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
（二）暗视野显微镜（dark field microscope）
暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接收从聚光器边缘斜射光后可发生散射。因此，可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
（三）相差显微镜（phase contrast microscope）
相差显微镜利用相差板的光栅作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
（四）荧光显微镜（fluorescence microscope）
荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。目前大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。滤光片有激发滤光片和吸收滤光片两种。用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。本法适用于荧光色素染色或与荧光抗体结合的细菌的检测或鉴定。
（五）电子显微镜（electron microscope）
电子显微镜用电子流作为光源，波长与可见光相比差几万倍，大大提高了分辨力，并用磁性电圈作为光学放大系统，放大倍数可达数万倍或几十万倍，常用于病毒颗粒和细菌超微结构的观察。常用的电镜有透射电镜和扫描电镜两种。透射电镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万至几十万倍，需要制备厚度为50～100nm的超薄切片。扫描电镜能显示物体表面的立体构象，且图像富有立体感。
（六）数码显微互动系统（digital microscopic interaction system）
数码显微互动系统包括显微镜系统、计算机软件系统、图像处理系统及语音问答系统四部分。数码显微互动系统是将数码显微镜和计算机网络集成，构成一个可以双向互动的多媒体教学系统。组成特点：显微数码系统内置式、多画面实时显示、可选择式多向语音问答系统及交谈式显微镜LED指针系统；教师端采用的系统由带有320万以上像素CCD摄像机的显微镜和一台高性能的PC机构成，每个学生端采用的系统由约200万像素的CMOS摄像机和一台普通PC机组成。这些PC机通过一个100M以太网互联，达到相互通信和传输图像数据的目的，工作原理见图2-1。
图2-1 数码显微互动系统工作原理
数码显微镜互动系统具有图像更清晰、操作更简便、功能更强大的特点。其教师端和学生端均有本地操作、远程操作的功能。教师可实时观察到课堂上每个学生的显微镜画面，及时发现实验中存在的问题并指导学生改正。学生也可以随时通过单通道的提问系统请求老师示教，并利用显微镜LED指针与老师交流讨论，并可与小组同学进行讨论而不影响小组外成员，使得师生间可实现图像、语音的网络互动，交流更加直观、有效。
二、普通光学显微镜的构造
普通光学显微镜按照镜筒分为单筒、双筒、多头显微镜，按光源可分为反光镜光源与自带光源显微镜等几种，其基本结构相似（图2-2），包括机械装置和光学系统两大部分。
（一）机械装置
（1）镜座是显微镜的底座，用以支持整个镜体。
（2）镜柱是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。
（3）镜臂一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。
图2-2 普通光学显微镜的基本结构
（4）镜筒连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。
（5）物镜转换器又称为旋转盘，位于镜筒下端的一个可旋转的凹形圆盘上，一般装有2～4个放大倍数不同的物镜。旋转它就可以转换物镜。当听到“咔”的响声时，方可观察玻片标本。
（6）载物台又称为镜台，在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器（推片器），推进器左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本做左右、前后方向的移动。
（7）调节器是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台做上下方向的移动。
1）粗准焦螺旋（粗螺旋）：大螺旋称粗螺旋，移动时可使镜台快速和较大幅度地升降，所以能迅速调节物镜和标本之间的距离使物像呈现于视野中，通常在使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物像。
2）细准焦螺旋（细螺旋）：小螺旋称细螺旋，移动时可使镜台缓慢地升降，多在运用高倍镜时使用，从而得到更清晰的物像，并借以观察标本的不同层次和不同深度的结构。
（二）光学系统
（1）目镜：装在镜筒的上端，通常备有2～3个，上面刻有“5×”、“10×”或“15×”符号以表示其放大倍数，一般装的是“10×”的目镜。
（2）物镜：装在镜筒下端的旋转器上，一般有3～4个物镜，其中*短的刻有“10×”符号的为低倍镜，较长的刻有“40×”符号的为高倍镜，*长的刻有“100×”符号的为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为“10×”，目镜为“10×”，其放大倍数就为10×10=100。
（3）聚光器：位于载物台通光孔的下方，由聚光镜和光圈组成，其作用是把光线集中到所要观察的标本上。①聚光镜：由一片或数片透镜组成，起汇聚光线的作用，加强对标本的照明，并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调节螺旋，转动它可升降聚光器，以调节视野中光亮度的强弱。②光圈：也称为虹彩光圈或孔径光阑，在聚光镜下方，由十几张金属薄片组成，其外侧伸出一柄，推动它可