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组织学与病理学实验教程

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商品详情

书名:组织学与病理学实验教程
定价:39.8
ISBN:9787030536662
作者:张雅青
版次:1
出版时间:2017-08

在线试读:
第*章 绪论
  第*节 学习内容与学习目标
  1. 组织学与病理学的内容主要包括以下三部分:
  (1)人体基本组织以及相关组织病理学的基本内容观察。
  (2)以器官和系统为中心的综合性实验,即以病变的主要器官为中心,强化病变器官从正常到异常以及主要病变器官与其他病变器官之间的横向联系,注重知识的连贯性,形成较为完整的知识体系。
  (3)以尸检病例分析为主的应用性实验,通过临床实际病例,强化基础医学形态知识与临床的纵向联系,注重基础与临床的结合,提高学生观察事物、分析问题和解决问题的能力。
  具体的实验内容及学时分配见表1-1。
  表1-1 实验项目名称和学时分配
  (1)通过对各种组织切片的观察,逐步培养观察、比较、分析和解决问题的能力,培养独立思考和独立工作的能力。
  (2)通过基本技能训练,熟练掌握使用光学显微镜的方法,了解组织和器官切片的一般制作过程,学习在光镜下正确绘图和描述所观察到组织或器官的形态结构特点。
  (3)通过病例分析的实验,回顾和巩固所学的理论知识,在加深对理论课内容理解的同时强化基础和临床的联系,能够掌握从正常结构到病理变化再到临床表现的连贯分析能力,反之从临床表现推断器官的病变,形成对疾病的“动态和有形”认识。
  第二节 组织学与病理学的实验方法
  一、大体标本观察
  各系统不同疾病大体标本的观察方法不同,这里仅介绍一般观察原则。
  (一)固定液种类不同,标本颜色不同
  实验课所用大体标本取自尸体或临床手术切除的活体标本,需用一定的固定液封存在标本瓶中进行保存。昀常用的固定液为福尔马林(10%甲醛溶液、无色透明),固定后组织呈灰白或灰黄色,血液呈灰黑色。有时为保持标本的原有颜色而采用原色固定液,又称天然颜色固定液,如硫酸镁混合液(无色透明),固定后的组织基本保持原有颜色,例如血液或富于血液的组织为红色。
  (二)判断所观察标本的类别
  运用已学过的解剖学知识,首先辨认标本是什么器官或组织,是哪一侧(有明显解剖学标志能分出左右的器官,如肺脏等),或是该器官组织的哪一部分(如心、脑、肠等的哪一部分)。
  (三)判定该标本中有无病理变化(病变)
  在确认是何器官组织之后,继而观察有无异常,即是否有病变。为避免遗漏,观察标本时应按一定顺序进行观察和描述。
  1. 判断器官的大小、重量、形状、颜色、硬度等有无异 常如果标本是器官的一部分,应回忆该器官正常大小(后附正常值),与标本比较,粗略估计标本整体大小。
  2. 器官表面 包膜是否光滑、增厚或变薄?有无紧张?皱缩?血管弯曲?有无异常物质被覆?有无穿孔?有无隆起、凹陷或变色?有无颗粒或结节?
  3. 器官切面 先观察实质、颜色有无改变?病灶位置、数量、大小、形状和颜色如何?表面有无隆起或凹陷?然后观察间质、有无异常物质(如脓液、胆石、寄生虫、栓子等)阻塞管腔?管道有无扩张、扭曲变形?淋巴结是否肿大?
  空腔器官自内向外逐一进行检查(自外向内亦可)如心脏的观察顺序是:心腔及内容物(血液)→心内膜及各瓣膜→腱索、乳头肌及肉柱→心肌→心外膜→冠状动脉等。胃肠的观察顺序是:胃肠腔及内容物→黏膜层→黏膜下层→肌层→浆膜层及肠系膜等。
  在上述有序观察中,如发现异常之处,要进一步检查,判定是什么病变。
  4. 病灶的情况 发现病灶时注意观察病灶数目、大小、形状、颜色、部位、分布、质地、有无包膜及其和周围组织的关系等(不同器官的具体观察方法见各系统的介绍)。
  (四)判定病变性质及其发展阶段
  运用所学病理学知识对标本进行综合分析,一般可按以下三个步骤进行:
  1. 实事求是地观察和正确描述标本中病变的形态特点,不要遗漏任何次要病变。
  2. 根据观察到的病变形态特点和所学病理知识,初步判定病变可能属于哪一种或哪几种病理过程(血液循环障碍?细胞与组织的损伤?炎症?肿瘤?)。有时应鉴别这种变化是生前发生还是死后出现的变化,如血管及心脏内的血液凝固就需要鉴别是生前血栓还是死后凝血块。
  3. 有时标本的形态学改变可能符合两种以上病变,此时可结合其他已知情况(如病史、病因、年龄和性别等)进行鉴别,作出正确诊断。
  应当指出,一旦确定是哪种病变,便应进一步运用所学的理论知识确定该病变属于哪个发展阶段,这也非常重要。
  (五)主动训练逻辑思维和推理能力
  1. 逻辑联想 在学习、观察一种病变时尽量做到几个联系:
  (1)将片面、静止的标本与病变在人体内发生发展的过程相联系,加深对疾病的认识。
  (2)从大体标本出发,联系切片中会出现什么病理改变,从宏观到微观更扎实、全面地掌握该病变。
  (3)从大体标本的病变出发,主动联系病人会有什么临床表现,为将来学习有关临床课打下良好的基础,这一点尤其重要。
  (4)具有两种以上病变的标本,还应注意分析判断多种病变间有无联系?它们是同一病理过程的病变组合,还是无关的不同疾病?例如有一心脏标本,冠状动脉有粥样硬化和血栓形成,同时还有心肌梗死,这三种病变依次有因果联系;而另一心脏标本冠状动脉有粥样硬化、二尖瓣上有血栓形成,它们之间则无因果关系,是性质不同的两种疾病。
  2. 思维导图 判断标本是什么器官→表面→(内或外)→切面→发现一种或多种、一个或多个病灶→病灶间的相互关系→大体所见联系镜下所见并结合理论知识分析本器官病灶与其他器官病灶之间的联系→找出主要病灶→判断什么疾病及病灶在哪个发展阶段→解释临床各种症状→找出死亡的病理依据(如果是死亡案例)。
  二、光学显微镜的构造和使用方法
  (一)光学显微镜的原理
  光学显微镜(light microscope)又称生物显微镜或光镜,是利用光线照明使微小物体形成放大影像的仪器。显微镜的主要部件是物镜和目镜,均为凸透镜。两者放大倍数的乘积就是显微镜的放大倍数。物镜的焦距短,目镜的焦距较长。物镜到被观察物AB的距离稍大于物镜的焦距,通过物镜得到倒立的放大的实像A'B'。AB对目镜来说是物体,使A'B'位于目镜的焦点以内,这样通过目镜就得到A'B'的放大的虚像A''B''。从图1-1上可以看出,A''B''的视角比眼睛直接看AB时的视角大得多,所以用显微镜可以看清非常微小的物体。
  图1-1 普通显微镜成像光路图
  (二)光学显微镜的基本构造及功能(图1-2)
  1. 显微镜的机械部分
  显微镜的机械装置包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗、细调节螺旋等部件。它起着支撑、调节、固定的作用。
  1. 镜座 镜座是显微镜的基本支架,稳定和支持整个镜体。
  2. 镜柱 镜座上面直立的短柱,连接镜座和镜臂。(老式显微镜会有)
  3. 镜臂 镜柱上面的弯曲部分,支持镜筒和载物台,取放显微镜时手握此臂。镜筒直立式光镜在镜臂和镜柱之间有可活动的倾斜关节,可使镜臂适当倾斜,便于观察;镜筒倾斜式显微镜的镜臂与镜柱连为一体,无倾斜关节。
  4. 镜筒 镜臂前上方的圆筒。镜筒上端安装目镜,下端安装物镜转换器,并且保护成像的光路与亮度。镜筒有单筒式和双筒式,前者又有直立和倾斜式两种,后者均为倾斜式。
  从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。镜筒长度的变化,不仅放大倍率随之变化,而且成像质量也受到影响。因此,使用显微镜时,不能任意改变镜筒长度。国际上将显微镜的标准筒长定为160mm,此数字标在物镜的外壳上。
  5. 物镜转换器 镜筒下方的圆盘状部件,盘上有3~4个圆孔,安装了不同放大倍数的物镜(低倍、高倍、油镜),转动物镜转换器,可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通,与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
  6. 载物台 放置标本片的平台,中央有通光孔,光线通过此孔照射在标本片上,镜台上装有弹簧标本夹和推动器,其作用为固定或移动标本的位置,使得镜检对象恰好位于视野中心。
  7. 推动器 是移动标本的机械装置,它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的,好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺,构成很精密的平面坐标系。如果我们须重复观察已检查标本的某一部分,在第*次检查时,可记下纵横标尺的数值,以后按数值移动推动器,就可以找到原来标本的位置。
  图1-2 普通光学显微镜
  8. 调节器 装在镜臂或镜柱两侧的粗细螺旋,用以调节焦距。
  (1)粗调节器(粗螺旋):转动时可使载物台(镜筒倾斜式显微镜)或镜筒(镜筒直立式显微镜)大幅度升降,迅速调节物镜和标本间距离使物像出现在视野中。在使用低倍镜时,先用粗调节器找到物像。
  (2)细调节器(细螺旋):转动时可使镜台或镜简短距离升降,使用高倍、油镜时或低倍镜下为了得到更清晰的物像时使用。微调螺旋每转一圈镜筒移动0.1毫米(100微米)。新近出产的较高档次的显微镜的粗调螺旋和微调螺旋是共轴的。
  9. 眼间距调整 使两目镜与两眼间距离一致,不同的人两眼间距离不同,应根据自己的情况加以调节。
  10. 瞳距的调整 使两目镜与两眼间距离一致,不同的人两眼间距离不同,应根据自己的情况加以调节。
  2. 显微镜的照明部分
  安装在载物台下方,包括反光镜、聚光器、光圈。
  1. 反光镜 较早的普通光学显微镜是用自然光检视物体,在镜座上装有反光镜。反光镜是由平、凹两面镜组成,可向任意方向转动,将投射在它上面的光线反射到聚光器的中央,照明标本。凹面镜聚光作用强,光线较弱的时候使用;平面镜聚光作用弱,光线较强时使用。电光源普通显微镜没有反光镜,一般在镜座内安装有照明装置,光线的强弱由底座上的光亮调节钮控制。
  2. 聚光镜 聚光器在载物台下面,它是由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的,聚光器可分为明视场聚光器和暗视场聚光器。其作用是将光源经反光镜反射来的光线聚焦于样品上,以得到昀强的照明,使物象获得明亮清晰的效果。聚光器的高低可以调节,使焦点落在被检物体上,以得到昀大亮度。一般聚光器的焦点在其上方1.25mm处,而其上升限度为载物台平面下方0.1mm。因此,要求使用的载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间,否则被检样品不在焦点上,影响镜检效果。聚光器前透镜组前面还装有虹彩光圈,它可以开大和缩小,影响着成像的分辨力和反差,若将虹彩光圈开放过大,超过物镜的数值孔径时,便产生光斑;若收缩虹彩光圈过小,分辨力下降,反差增大。因此,在观察时,通过虹彩光圈的调节再把视场光阑(带有视场光阑的显微镜)开启到视场周缘的外切处,使不在视场内的物体得不到任何光线的照明,以避免散射光的干扰。
  3. 显微镜的光学部分
  1. 目镜 安装在镜筒上端,通常备有2~3个,上面刻有5×、10×或16×符号表示放大倍数,一般用10×目镜。目镜的作用是将物镜放大的标本像(实像)再放大成虚像。观察者可根据工作需要和标本的实际情况,恰当选择不同放大倍数的目镜。接目镜内常安放一指针,便于指示视野中的某一结构。目镜可旋转,目镜底部有相应的刻度,以供两眼度数不同的人调节。目镜放大倍数过大,反而会影响观察效果。
  2. 物镜 安装在物镜转换器上,一般有3~4个物镜,分别是4×、l0×、40×(50×)和l00×,在每个接物镜的镜管上分别标有醒目的红色、黄色、蓝色和黑白相间线圈。4×和l0×称低倍镜,40(50)×称高倍镜,l00×是油浸镜,从外形上观察不同放大倍数的物镜,可见油镜昀长,高倍镜次之,低倍镜昀短。通常在物镜上标有主要性能指标—放大倍数和镜口率,如10/0.25、40/0.65和100/1.03,镜筒长度和所要求的载玻片厚度为:160/0.17(mm)(表1-2)。
  表1-2 不同倍数物镜的比较
  3. 滤光片 在光阑下方有一金属圈,可安放滤光片,借以改变光源的色调和强弱,便于观察和摄影。常用滤光片有三种:①毛玻片——减弱光强度、使光漫射且光度柔和。②蓝玻片——白炽灯光照明时用,将黄色灯光校正成白光。③绿玻片——通常适用。
  (三)显微镜的性能
  显微镜分辨能力的高低决定于光学系统的各种条件。被观察的物体必须放大率高,而且清晰,物体放大后,能否呈现清晰的细微结构,首先取决于物镜的性能,其次为目镜和聚光镜的性能。
  1. 数值孔径(numerical aperture,NA) 反映该物镜分辨率的大小,数值孔径是物镜和聚光器的主要参数,也是判断它们性能的昀重要指标。数值孔径和显微镜的各种性能有密切的关系,它与显微镜的分辨力成正比,与焦深成反比,与镜像亮度的平方根成正比。
  数值孔径计算方程为:NA=n·sin(α/2)
  NA为数值孔径,n为物镜与标本之间的介质折射率,α为物镜的镜口角,折射率大的介质辨率也大。
  几种物质的介质的折射率如下:空气为1.0,水为1.33,玻璃为1.5,甘油为1.47,香柏油为1.52。所以镜检时,滴加的香柏油,因香柏油具有与玻璃相似的折光率。所以镜检时,使光源尽可能多的进入物镜中,避免光线通过折射率低的空气(折射率1.0)而散失光线,因而能提高物镜的分辨力,使物象更加清晰。
  2. 分辨率(resolution) 是指显微镜能够分辨物体上的昀小间隔的能力,分辨率与物镜的数值孔径成正比,与光波波长成反比。因此,物镜的数值孔径越大,光波波长越短,
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