书名：临床检验技能学课程群实验  
定价：38.0  
ISBN：9787030518729  
作者：伊正君，李猛  
版次：1  
出版时间：2017-03  

内容提要：  
本教材是科学出版社出版的《临床检验技能学》基础上的递进升级版，在知识、技能、综合素质培养上对学生提出了更高要求。该教材特色：引入大量临床案例、实验项目整合优化、引入创新实验项目。教材共分二篇：第*篇综合性实验，包括临床基础检验学案例分析、临床生物化学检验案例分析、临床免疫学检验案例分析、临床微生物学检验案例分析、临床输血学检验案例分析、临床血液学检验案例分析、临床分子诊断学案例分析与临床实验室管理学案例分析，共8章，包括24个案例、53个实验项目。第二篇为创新性试验，共1章，包括8个实验项目。  

目录：  
目录  
第一篇 综合性试验 1  
第一章 临床基础检验学案例分析 1  
实验一 大便常规检查 1  
实验二 凝血功能测定 3  
实验三 腹水物理学检查 4  
实验四 腹水黏蛋白试验 5  
实验五 脑脊液物理学检查 7  
实验六 脑脊液球蛋白试验 8  
第二章 临床生物化学检验案例分析 9  
实验一 脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联速率法测定血清尿素 9  
实验二 碱性苦味酸法测定血清肌酐 11  
实验三 尿酸酶-过氧化物酶偶联法测定血清尿酸 12  
实验四 N-乙酰半胱氨酸法(NAC)测定血清肌酸激酶 13  
实验五 免疫抑制法测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)的活性 15  
实验六 离子选择电极法测定血清钾、钠、氯 16  
实验七 葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 18  
实验八 口服葡萄糖耐量试验(OGTT) 19  
实验九 血清丙氨酸氨基转移酶测定 21  
实验十 双缩脲法测定血清总蛋白 22  
实验十一 重氮法测定血清胆红素 24  
第三章 临床免疫学检验案例分析 26  
实验一 间接免疫荧光法检测ANA 26  
实验二 免疫印迹试验 28  
实验三 免疫浊度法检测补体 30  
实验四 时间分辨荧光免疫法检测乙肝表面抗原 31  
实验五 电化学发光法检测AFP 33  
实验六 酶联免疫吸附(ELISA)法检测CA199 34  
实验七 胶体金法检测结核分枝杆菌抗体 36  
实验八 酶联免疫斑点(ELISPOT)检测 37  
第四章 临床微生物学检验案例分析 40  
实验一 尿液标本的细菌定量培养 41  
实验二 尿液标本的细菌学鉴定与药物敏感性试验 43  
实验三 痰涂片结核杆菌检测 46  
实验四 痰标本结核分枝杆菌核酸检测 47  
实验五 真菌(1-3)-β-D-葡聚糖检测 50  
第五章 临床输血学检验案例分析 52  
实验一 ABO血型、RhD血型的鉴定 53  
实验二 红细胞不规则抗体筛查试验 54  
实验三 输血前交叉配合试验 56  
实验四 新生儿红细胞直接抗球蛋白试验 60  
实验五 新生儿血清游离抗体检测 61  
实验六 热放散试验 63  
实验七 乙醚放散试验 64  
实验八 红细胞不规则抗体鉴定试验 66  
实验九 红细胞直接抗球蛋白试验 68  
实验十 血型抗体效价测定 69  
实验十一 血浆置换 71  
第六章 临床血液学检验案例分析 76  
实验一 血清铁蛋白检测 77  
实验二 细胞化学染色检查(以POX为例) 78  
实验三 骨髓细胞染色体检查 79  
实验四 白血病融合基因BCR/ABL p210检测 81  
实验五 嗜水气单胞菌溶素变异体检测 84  
第七章 临床分子诊断学案例分析 86  
实验一 人外周血染色体G显带检查 87  
实验二 封闭抗体检测-流式细胞仪法 88  
实验三 荧光定量PCR法检测解脲脲原体 90  
实验四 DNA亲权鉴定 92  
第八章 临床实验室管理学案例分析 96  
实验一 室内质控图的制作及质控规则 96  
实验二 钩状效应的解决方案 98  
实验三 室间质评 99  
第二篇 创新性试验 102  
实验一 重组人组织型纤溶酶原激活物的制备 102  
实验二 伤寒沙门菌O抗体竞争ELISA检测方法的建立 103  
实验三 HCG免疫胶体金检测方法的建立 105  
实验四 荧光标记CD34抗体的制备 106  
实验五 甲胎蛋白化学发光免疫检测方法的建立 108  
实验六 体外构建分枝杆菌肉芽肿模型 110  
实验七 嗜铜绿假单胞菌烈性噬菌体的分离纯化 111  
实验八 曲霉菌28S rDNA D1-D2 荧光定量PCR检测方法的建立 113  

在线试读：  
第*篇 综合性试验  
第*章 临床基础检验学案例分析  
　　【案例1】 患者，男，39岁。  
　　主诉：半个月前自觉腹胀、乏力，入院前2天加重，出现恶心、黑便。  
　　既往史：2年前患血吸虫病。  
　　体格检查：T 36.5℃，P 64次/分，R 16次/分，BP 106/61mmHg。神志清醒，精神差，心肺(-)，脾肋下2指可触及，质中等，全腹压痛，移动性浊音(+)，双下肢水肿。  
　　实验室检查：  
　　粪便潜血：阳性。  
　　血液检查：红细胞计数(RBC)3.28×1012/L，血红蛋白(Hb)96g/L，白细胞计数(WBC) 4.03×109/L，血小板计数(PLT)84×109/L，中性分叶核0.70，中性杆状核0.01，淋巴细胞(L)0.17，单核细胞(M)0.02，嗜酸粒细胞(E)0.10。  
　　初步诊断：血吸虫病。  
　　【问题】 为明确诊断，首先应该做的实验室检测是什么？  
　　【解析】 患者既往病史有血吸虫病，该病会引起肝硬化，门静脉高压，进而引起双下肢水肿，同时该患者嗜酸粒细胞增*，故怀疑为血吸虫病，因此首先对该患者进行大便常规及潜血检查；大便常规主要检测是否有血吸虫虫卵，如有，注意虫卵的形态。  
实验一 大便常规检查  
一、实验原理  
　　取患者约黄豆粒大小粪便(带有脓血黏液部分)，用生理盐水制成粪便悬浊液进行粪便有形成分检查；检查内容主要有红细胞、白细胞、虫卵等。  
　　血吸虫虫卵形态：淡黄色，椭圆形，无小盖，卵壳均匀，表面常黏附许多宿主组织残留物，侧棘短小，卵内含有成熟毛蚴。  
二、实验材料、试剂与仪器  
　　生理盐水、载玻片、滴管、显微镜、盖玻片、竹签、无菌杯。  
三、操作步骤  
　　(1)留取患者带脓血或黏液的粪便，黄豆粒大小即可。如没有黏液或脓血，应从粪便表面及深部多部位取材。  
　　(2)在载玻片上滴2滴生理盐水，用竹签挑取步骤(1)中留取粪便制成粪便悬浊液。  
　　(3)盖上盖玻片，显微镜下观察粪便有形成分。  
四、结果分析  
　　对粪便中的有形成分，如红细胞、白细胞、虫卵等进行检查，如果有血吸虫虫卵，说明该患者为血吸虫病；如未发现虫卵，也不能排除血吸虫病的可能，因为在血吸虫病晚期较难在粪便中查找到虫卵，此时应多次采样送检(＞3次)，阴性时加做免疫血清学实验进行确诊。  
　　在该案例中，在患者粪便中可见到大量红细胞、白细胞，但多次送检未见虫卵，并不能完全排除血吸虫病的可能，该患者后加做免疫血清学实验得到确诊。  
五、注意事项  
　　(1)注意留取带脓血或黏液粪便。如没有黏液或脓血应从粪便表面及深部多部位取材。  
　　(2)制备粪便悬浊液时也应挑取已留取的粪便中带脓血或黏液的部分。  
　　【案例结论分析】 该患者粪便检查结果显示：潜血阳性、白细胞增*，虽然未见血吸虫虫卵，但结合前述的血吸虫感染史、嗜酸粒细胞增*、血压增*、双下肢水肿，推断患者可能为血吸虫病晚期，故此时可能查不到血吸虫虫卵。确证时通过免疫学方法检测血吸虫抗体或行直肠镜活组织检查。  
　　【案例2】 患者，男，40岁，工人。  
　　主诉：乏力、食欲缺乏3个月，腹胀、黄疸1周，皮下出血和瘀斑3天入院。  
　　既往史：家族中无遗传性疾病史。  
　　体格检查：T 38.9℃，P 92次/分，R 26次/分，BP 128/80mmHg。神志清醒，精神萎靡，急性病容，消瘦。全身皮肤、黏膜重度黄染，胸部和双下肢皮下散在出血点和瘀斑，全身浅表淋巴结均未触及，心、肺正常。腹膨隆，肝区深压痛(+)，肝右肋下3cm，质中、边缘光滑。脾左肋下未及。移动性浊音(+)，肠鸣音2～3次/分。  
　　辅助检查  
　　腹部B超提示：肝右肋下3cm伴中度腹水，脾正常。胸片、心电图未见明显异常。  
　　实验室检查：  
　　血常规：WBC 13.2×109/L，PLT 172×109/L。  
　　尿常规：尿胆原阳性、尿胆红素阳性。  
　　大便常规：粪胆原阳性。  
　　生化及免疫学检查：尿素氮(BUN)16.5mmol/L、肌酐(Cr)154μmol/L、血糖8.7mmol/L，HBsAg(+)、HBsAb(-)、HBeAg(+)、HBeAb(-)、HBcAb(+)，谷草转氨酶(AST)670U/L，谷丙转氨酶(ALT)395U/L，总胆红素(TBIL)160μmol/L，结合胆红素(DBIL)91.3μmol/L，非结合胆红素(IBIL)68.7μmol/L，血清总蛋白(TP)55g/L，白蛋白(ALB)21g/L，球蛋白(GLB)34g/L。  
　　初步诊断：乙型肝炎。  
　　【问题】 本例皮下散在出血点和瘀斑的*主要原因是什么？为进一步证实出血原因及治*出血，还需要做哪些实验室检查？  
　　【解析】 从上述病例分析可知，患者处于乙型肝炎急性期，肝细胞大量被破坏，肝功能明显降低。一方面肝脏合成凝血因子减少，另一方面清除抗凝物质能力降低，从而导致凝血功能异常而引起出血。在本案例中，患者皮下出现散在出血点和瘀斑，其病因*可能是由于肝脏疾病引起的凝血功能障碍出血，因此，要进行凝血功能检查，一般包括活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(DD)等检查项目。此外，B超结果显示患者出现腹水，要对腹水出现的原因进行探查，因此要进行腹水检查。  
实验二 凝血功能测定  
一、实验原理  
　　(1)凝血酶原时间(prothrombin time，PT)测定原理：在待测血浆中，加入足够量的组织因子(tissue factor，TF)和适量Ca2+，满足外源性凝血条件，从加入Ca2+到血浆凝固所需的时间即为PT，主要反映外源性凝血途径是否正常。  
　　(2)活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)测定原理：37℃条件下，以白陶土激活Ⅻ，以脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板第三因子，在Ca2+参与下，观察血浆凝固所需的时间，即为APTT，是内源性凝血系统较敏感和*为常用的筛选试验。  
　　(3)纤维蛋白原(fibrinogen，FIB)是由肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质，是纤维蛋白的前体，在凝血酶的作用下，α链与β链分别释放出A肽和B肽，生成纤维蛋白单体。这些单体易于聚合成纤维蛋白多聚体，此时单体之间借氢键与疏水键相连。紧接着，在Ca2+与活化的因子的作用下，单体之间以共价键相连，可变成稳定的不溶性纤维蛋白凝块，完成凝血过程。  
　　(4)D-二聚体(D-dimer，DD)是纤溶酶对纤维蛋白凝块溶解所产生的一种特异性降解产物，是继发性纤溶较好的标志物。  
二、实验材料、试剂与仪器  
　　109mmol/L枸橼酸钠抗凝试管、采血针、压脉带、0.5%聚维酮碘、全自动血凝检测分析仪、低速医用离心机、APTT检测试剂盒、PT检测试剂盒、FIB检测试剂盒、DD检测试剂盒、洗针液、氯化钙、缓冲液、去离子水及相关质控品等。  
三、操作步骤  
　　(一)标本准备  
　　(1)用109mmol/L枸橼酸钠抗凝试管采集患者全血1.8ml，迅速混匀。  
　　(2)将标本置于低速医用离心机中，3500r/min离心3min。  
　　(二)仪器准备  
　　(1)检查仪器冲洗液、洗针液、废液桶。  
　　(2)打开仪器电源，开机，仪器进行自检。  
　　(3)根据各种试剂及质控要求复融试剂与质控品。  
　　(4)加装各种应用试剂。  
　　(5)加装质控品对仪器进行质量控制检测，质控合格即进行实验。如不合格，检查仪器及试剂，再次进行质量控制检测，直到质控通过。  
　　(6)加装样本，进行检测，并记录检测结果。  
四、结果分析  
　　(1)凝血酶原时间(PT)：正常范围为12～14s；超过正常范围3s以上有临床意义。  
　　(2)活化部分凝血活酶时间(APTT)：正常范围为22.5～40.5s。  
　　(3)纤维蛋白原(FIB)：正常范围为2～4g/L。  
　　(4)D-二聚体(DD)：正常范围为0～0.5mg/L。  
　　在本案例中，测得的PT、APTT、FIB、DD分别为20s、65s、0.5g/L、5 mg/L，由此可见PT与APTT延长，FIB减少，DD升高。从PT与APTT延长及FIB减少可推知凝血途径异常，患者有出血倾向，这是由于肝功能受损引起的；从DD升高可推知患者体内有血栓形成。  
五、注意事项  
　　(1)检测PT、APTT、FIB、DD时，用含109mmol/L枸橼酸钠的真空采血管(浅蓝色盖)。  
　　(2)采集静脉血进行PT、APTT、FIB、DD检测，采血量与抗凝剂体积比为9∶1。  
　　(3)采血后要立刻轻轻颠倒混匀，切勿剧烈振荡。  
　　(4)血凝实验结果易受多种因素(如抗凝剂、抗凝物质)的影响，实验前后要考虑这些因素的影响。  
实验三 腹水物理学检查  
一、实验材料、试剂与仪器  
　　患者腹水、显微镜、改良牛鲍计数板、微量吸管、小试管、生理盐水或红细胞稀释液、冰醋酸、白细胞稀释液、瑞氏染液或瑞-吉染液。  
二、操作步骤  
　　(1)观察标本颜色、透明度、有无凝块。  
　　(2)白细胞计数  
　　1)去除红细胞：在小试管内放入冰醋酸1～2滴，转动试管，使内壁黏附少许冰醋酸后倾去，滴加混匀腹水3～4滴，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。  
　　2)充池：用微量吸管取混匀破坏红细胞后的腹水充入血细胞计数板的2个计数池内。  
　　3)计数：静置2～3min后，低倍镜计数2个计数池内四周和中央大方格共10个大方格内的有核细胞数。  
　　4)计算：10个大方格有核细胞总数即每微升腹水中的有核细胞总数，再换算成每升腹水中的有核细胞数。  
三、结果分析  
　　白细胞分类计数：  
　　1. 直接分类法 有核细胞计数后，将低倍镜转为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞形态和细胞核形态进行分类，共分类计数100个有核细胞，分别计数单个核细胞(包括淋巴细胞、单核细胞及间皮细胞)和多个核细胞(粒细胞)百分率。  
　　2. 涂片染色分类法 在抽出穿刺液后，立即以1000r/min离心5min，取沉淀物制成均匀的薄片，置于室温下或37℃恒温箱内尽快干燥，瑞氏染色或瑞-吉染色后油镜分类计数100个有核细胞。一般标本中可见到淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、间皮细胞等。  
　　在该案例中，患者漏出液中白细胞计数为16×106/L，单个核细胞计数为76%，多个核细胞计数为24%，可见漏出液中白细胞数量较少，且主要以淋巴细胞等单个核细胞为主，说明患者可能感染病毒。  
四、注意事项  
　　(1)有核细胞计数应包括间皮细胞。  
　　(2)必要时可采用细胞玻片离心沉淀仪收集细胞，以提高白细胞分类计数的准确性。  
　　(3)有核细胞分类计数误差大，尤其是陈旧性、细胞变形的标本，故推荐采用涂片染色分类计数。  
　　(4)染色分类计数过程中，若发现间皮细胞和不能分类的异常细胞应另外描述或做HE等染色查找肿瘤细胞。  
实验四 腹水黏蛋白试验  
一、实验原理  
　　浆膜腔上皮细胞在炎症刺激下会分泌大量黏蛋白。黏蛋白是一种酸性糖蛋白，其等电点pH为3～5，因此，可在稀醋酸中出现白色沉淀。  
二、实验材料、试剂与仪器  
　　患者腹水、100ml量筒、滴管、冰醋酸、蒸馏水。  
三、操作步骤  
　　(1)加试剂：加2～3滴冰醋酸于100ml量筒中，再加大约100ml蒸馏水，混匀，此时溶液的pH为3～5，静置数分钟。  
　　(2)加标本：垂直滴加待测标本1滴于量筒中。  
　　(3)观察结果：立即在黑色背景下观察有无白色云雾状沉淀生成及其下降程度。  
四、结果分析  
　　阴性：清晰，不显雾状或有轻微白色雾状浑浊，但在下降过程中消失。  
　　阳性：出现白色雾状浑浊并逐渐下沉至量筒底部不消失。  
　　阳性程度的判断：渐呈白雾状为(±)；可见灰白色雾状为(+)；白色薄云状为(++)；白色浓云状为(++++)。  
　　在本案例中，黏蛋白实验结果为阴性，说明腹水性质为漏出液。  
五、注意事项  
　　(1)血性浆膜腔积液经离心沉淀后，用上清液进行检查。  
　　(2)该实验中要选择合适量程的量筒。  
　　(3)加入标本后立即在黑色背景下仔细观察结果。如浑浊不明显，下沉缓慢，中途消失者为阴性。  
　　【案例结论分析】 本患者腹水检查结果中发现白细胞数量较少且主要以单个核细胞为主，黏蛋白试验为阴性，由此可确定本患者的腹水为漏出液；患者乙型肝炎标志物为典型的“大三阳”，对患者的凝血功能检测发现患者PLT正常，PT、APTT等明显延长，FIB减少，DD增*，进一步证实出血原因为病毒性肝炎导致的肝脏损害而引起的凝血功能异常性出血；因而在治*方面可采取治*原发病、补充凝血因子、补充维生素等措施，治*过程中要加强出凝血活性检测，并根据检测结果及时调整用药方案。  
　　【案例3】 患者，男，25岁。  
　　主诉：昏迷，检查不合作。  
　　现病史：3天前因劳累后饮酒出现发热、寒战、剧烈头疼。4h前出现意识障碍，自言自语，回答不出问题，并出现抽搐，抽搐时双眼上翻、凝视，口吐白沫，唇周发绀，双手握拳，四肢抽动，呼之不应，持续0.5h后停止。  
　　体格检查：T 39.1℃，P 106次/分，R 25次/分，BP 113/60mmHg。双瞳等大约0.6mm，眼底检查，视盘水肿，光反射迟钝，颈抵抗明显，双肺、心、腹、淋巴结、皮肤均无异常，膝跟腱反射亢进，右侧巴彬斯基征明显。  
　　实验室检查：  
　　血常规：WBC 12.2×109/L，PLT 129×109/L。  
　　尿常规：葡萄糖(Glu)(-)，蛋白质(PRO)(-)，酮体(KET)(-)。  
　　大便常规：潜血(-)。  
　　生化及免疫学检查：血糖5.3mmol/L，AST 59U/L，ALT 96U/L，γ-谷氨酰转移酶(γ-GGT) 101U/L，脑脊液免疫球蛋白IgG 147g/L，IgA 11g/L，脑脊液IgM1.12g/L，脑脊液TORCH单纯疱疹病毒抗体IgM阳性、单纯疱疹病毒抗体IgG阳性。  
　　初步诊断：中枢神经系统感染。  
　　【问题】 结合上述病例信息，为帮助该患者更好地诊断，需要做脑脊液检查吗？如果需要，应重点包含哪些项目？  
　　【解析】 患者体格检查发现中枢神经系统感染症状明显，故行腰椎穿刺抽取脑脊液6ml，分别装入3支无菌试管，立即送检，做脑脊液常规及生化检查，同时还要兼顾是否有病毒或者细菌性感染情况的发生，因而应做脑脊液细菌培养、真菌镜检及病毒学检测。