布鲁氏菌病是世界上流行最广泛的人兽共患病之一，但因为其非特异的临床症状，也成为了最容易被忽视的七种疾病之一。人群对于布鲁氏菌却是普遍易感的，随着畜牧业的迅速发展，我国牲畜饲养量逐渐增加，国内与国际畜牧产品的流通速度加快，使布鲁氏菌病扩散速度增快，流行范围也不断扩大，成为了世界上危害公民生命健康和财产安全的公共卫生问题。近年来，新的免疫学技术和分子生物学技术发展迅速，布病的检测方法也应该适时更新，满足于临床、疾（疫）控中心和科研所需。本书将为布病的防控和科研提供有力的技术支撑。本书包括布鲁氏菌的实验室检测及鉴定；布鲁氏菌分子分型及基因组测序技术；噬菌体分离、增值及应用；血清学检测技术；多重荧光定量技术；数字PCR技术；质谱鉴定技术；细胞免疫反应的检测方法；布鲁氏菌有效免疫抗原制备；菌种保存冻干方法；现场快速检测技术；实验室生物安全等。这些方法既可以满足基层人员检测所需，也可以满足专业人员科研所需。

姜海，博士，中国疾控中心传染病预防控制所主任，中国地方病协会布鲁氏菌病专业委员会委员兼秘书，中国微生物学会科技开发与咨询工作委员会委员，生态健康与人类生态专业委员会委员，中国研究型医院学会生物标志物专业委员会委员。近5年来，以第一作者（通讯作者）发表SCI文章20余篇，获发明专利2项。承担国家自然科学基金1项、传染病重大专项子课题3项，中美新法再发传染病3项。

第一章　抗体检测方法/ 1第一节　血清学检测样本的采集/ 1第二节　虎红平板凝集试验/ 2第三节　胶体金免疫层析试验/ 3第四节　间接酶联免疫吸附试验/ 4第五节　试管凝集试验/ 8第六节　微量凝集试验/11第七节　抗球蛋白试验/13第八节　半胱氨酸凝集试验/15第九节　补体结合试验/16第十节　荧光偏振试验/21第十一节　全乳环状试验/24第二章　病原学检测方法/26第一节　布鲁氏菌的分离培养/26第二节　布鲁氏菌的鉴定/31第三节　药敏试验/39第三章　分子生物学检测方法/42第一节　核酸提取/42第二节　布鲁氏菌属的鉴定/42第三节　布鲁氏菌种型鉴定/55第四节　布鲁氏菌基因分型/59第五节　布鲁氏菌的宏基因组测序分析/62第六节　布鲁氏菌的全基因组测序分析/63第七节　基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定布鲁氏菌/71第八节　疫苗株和野毒株的鉴别/81第四章　布鲁氏菌病疫苗质量控制及评价技术/86第一节　成品检验/87第二节　鉴别检验/97第三节　动物实验/ 103附录/ 113附录一　布鲁氏菌病实验室检测的相关标准性文件/ 113附录二　布鲁氏菌生物安全实验室操作规范/ 113附录三　试验材料、试剂制备/ 118附录四　布鲁氏菌菌种运输、保藏及复苏/ 121附录五　样本处理流程/ 123附录六　病原体多重核酸高通量检测实验步骤（湿实验）/ 124参考文献/ 130

布鲁氏菌病（简称;布病）是世界上流行最广泛的人兽共患病之一，但却因为其不典型的临床症状成为了最容易被忽视的7 种疾病之一。布鲁氏菌病是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，也是《中华人民共和国动物防疫法》规定管理的二类动物疫病。人主要通过接触病畜及其产品或污染物及环境而感染。随着我国畜牧业稳步发展，家畜饲养量不断增加，动物及其产品流通频繁；再加之牛羊养殖方式多样，动物防疫、检疫和监管工作难度大，家畜布鲁氏菌病防治形势依然复杂严峻，不仅严重影响畜牧业生产，也危及人民群众身体健康和公共卫生安全。当前我国布鲁氏菌病疫情流行出现了新的特征，不仅在北方地区发病率较高，在南方地区的流行范围和强度也有所增加。布鲁氏菌病的诊断一直以来都是布鲁氏菌病防控领域的热点。布鲁氏菌的分离培养是布鲁氏菌病实验室诊断感染的金标准，但是由于分离培养及鉴定时间较长，生物安全风险较高，不适合普遍使用。目前我国使用最广泛的血清学检测方法为虎红平板凝集试验和试管凝集试验。随着对布鲁氏菌病诊断技术研究的深入，许多改良的传统检测方法和新方法不断出现。例如微量凝集试验就是在试管凝集试验的基础上改进的一种抗体检测方法，它具有微量、简便且同时可以检测多个样品的特点。其他免疫学检测方法，如胶体金免疫层析试验、荧光偏振试验、间接酶联免疫吸附试验逐渐被应用于临床诊断。这些试验不仅时间短、操作简便，准确率也比传统试验高。此外，许多核酸检测方法也有广泛的应用前景，如实时荧光PCR 法、环介导等温扩增试验、微滴式数字聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术、CRISPR_Cas12/Cas13 等。疫苗免疫是布鲁氏菌病防控最为有效的方式之一，为了保证布鲁氏菌病疫苗的免疫保护效果、最大限度地保障生物安全，其质量控制及评价至关重要。本书有布鲁氏菌病疫苗质量控制及评价技术相关内容，可为该领域工作者提供参考。本书参考了WS 2692019《布鲁氏菌病诊断》，并结合世界卫生组织、美国和欧洲临床实验室标准委员会等国际权威学术组织的文献资料进行编写。本书的编写过程得到了中国地方病协会布鲁氏菌病专家委员会专家们的鼎力支持，然而限于编者的专业水平，一定还存在不妥之处，恳请读者对本书提出中肯的意见，以利于改进布鲁氏菌病实验室检测和研究工作。编　者2024 年1 月